Cromatografia

La cromatografía es una técnica de análisis químico utilizada para separar sustancias puras de mezclas complejas. Esta técnica depende del principio de adsorción selectiva (no confundir con absorción). La cromatografía fue descubierta por el botánico ruso, de origen italiano, Mikhail Tswett en 1906, pero su uso no se generalizó hasta la década de 1930. Tswett separó los pigmentos de las plantas(clorofila) vertiendo extracto de hojas verdes en éter de petróleo sobre una columna de carbonato de calcio en polvo en el interior de una probeta. A medida que la solución va filtrándose por la columna, cada componente de la mezcla precipita a diferente velocidad, quedando la columna marcada por bandas horizontales de colores, denominadas cromatogramas. Cada banda corresponde a un pigmentodiferente.
La cromatografía es probablemente la más versátil de las técnicas de separación: es aplicable a cualquier mezcla soluble o volátil. De hecho las técnicas de separación suelen dividirse en dos grandes grupos: cromatográficas y no cromatográficas. La elección de una técnica cromatográfica concreta dependerá de la naturaleza y cantidad de la muestra, del objetivo de la separación y de laslimitaciones del tiempo y equipo asequible.
Podemos distinguir 3 tipos de cromatografía dependiendo si la fase estacionaria/fase móvil es sólido/líquido, líquido/líquido o líquido/gas:
• Si es sólido/líquido, cabe distinguir entre:
Cromatografía de adsorción: El sólido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase móvil (liquida o gaseosa) (Fuerzas de Van der Waals).
Cromatografia de cambioiónico: el sólido es un cambiador de iones (fuerzas electrostáticas).
Cromatografia de exclusión (o de geles): el sólido es un gel formado por polímeros no iónicos porosos que retienen a las moléculas de soluto según su tamaño.
Cromatografia de afinidad: es un tipo especial de cromatografia de adsorción, utilizada especialmente en bioquímica, en la que un sólido tiene enlazado un llamadoligando de afinidad que puede ser por ejemplo, un indicador enzimático o un anticuerpo.
• Si es líquido/líquido, cabe distinguir:
Cromatografía de partición: el soluto se reparte entra la fase móvil (liquido o gas) y la fase estacionaria.
• Si es líquido/gas, cabe distinguir entre:
Cromatografía gas-liquido (CGL), que es una cromatografía de partición.
Cromatografía gas-sólido (CGS), que es unacromatografía de adsorción.
Si es un fluido supercrítico, (fluido calentado a una temperatura superior a la temperatura critica, pero simultáneamente comprimido a una presión mayor que su presión critica), se trata de la cromatografía de fluidos supercríticos (CFS), que puede ser de partición o de adsorción.
Las técnicas cromatográficas, según el dispositivo utilizado para conseguir la separaciónentre la fase móvil y la estacionaria, pueden ser: en columna y plana.
Cromatografía en columna: Se utiliza un tubo cilíndrico, en cuyo interior se coloca la fase estacionaria y a su través se hace pasar la fase móvil. El flujo de la fase móvil (liquido o gas) a través de la estacionaria se consigue:
1) por presión,
2) por capilaridad,
3) por gravedad.
Cromatografia plana: La faseestacionaria está colocada en una superficie plana que en realidad es tridimensional, aunque una de sus dimensiones es muy reducida, por lo que puede considerarse bidimensional. Se divide en dos tipos generales:
1. -Cromatografía en papel: en la que el papel absorbente actúa como soporte de la fase estacionaria (cromatografia de partición). Una muestra líquida fluye por una tira vertical de papelabsorbente, sobre la cual se van depositando los componentes en lugares específicos.
2. -Cromatografía en capa fina: en la que un sólido actúa como fase estacionaria (cromatografia de partición), se extiende en una capa delgada sobre una placa, generalmente de vidrio.
El uso de la cromatografía está ampliamente extendido en el análisis de alimentos, medicinas, sangre, productos petrolíferos y de...