Cromatografía De Flujo

1.- OBJETIVOS:


Los objetivos de la práctica son:

-Determinar el flujo óptimo de la fase móvil en cromatografía líquida en columna de alta resolución (HPLC).

-Determinar la resolución entre picos cromatográficos.

-Identificar y cuantificar los picos en un cromatograma de una muestra de agua.



2.- CÁLCULOS Y RESULTADOS:

(DATOS EXPERIMENTALES:

Los datosexperimentales obtenidos son los cromatogramas que se mostrarán posteriormente cuando se haga uso de ellos para resolver las cuestiones.




(CÁLCULOS:

Preparación de 500 mL de fase móvil : ftalato ácido de potasio 4 mM:

P.M.(Ftalato)=204,23g/mol.
V=500(10-3 L [pic]0,40846g.
M=4(10-3 molar

Hemos pesado 0,405g de ftalato ácido de potasio y los hemos enrasadohasta un volumen de 500 mL en la botella de la fase móvil. El pH de la disolución fue 4,21 (Tª=25ºC), por lo que no añadimos NaOH.




(CUESTIONES:

1.-Representar gráficamente la altura del plato teórico frente al flujo real de fase móvil. Estimar cual será el flujo más eficaz y discutid por qué. Finalmente, en la práctica, ¿qué flujo escogeríais como “óptimo”?


Utilizamosdisoluciones de mezclas patrón de NO-3 de 100 ppm, Cl-de 10 ppm y Br- de 100 ppm.
El cálculo del flujo real lo realizamos con las fórmulas: Freal = [pic]
donde V = (m(g)/ ((g/mL)
Consideramos la densidad de la fase móvil como 1g/mL.

A continuación construímos la TABLA 1:

|Flujo (mL/min) |t(recogida) (min) |Masa vial lleno (g) |Masa vial vacio (g) |(m (g)|Flujo real (mL/min) |
|1,6 |1 |11,1816 |9,6096 |1,572 |1,572 |
|1,3 |1 |10,7515 |9,4274 |1,324 |1,324 |
|1,0 |1 |10,6280 |9,6246 |1,004 |1,004|
|0,7 |1 |10,2530 |9,5435 |0,7095 |0,7095 |
|0,4 |1 |9,9391 |9,5690 |0,3701 |0,3701 |


Ahora calculamos la altura equivalente del plato teórico (AEPT). La AEPT la podemos definir como :

AEPT = H = L/ N , donde L es la longitud de la columna (25 cm) y N el número de platos teóricos, que se calcula como:
N = 16 [pic] ,
donde tR es el tiempo de retención (desplazamiento(mm) / vpapel (mm/min) ) y W es la anchura de banda (anchura (mm) / vpapel (mm/min) ). La velocidad del papel en todos los casos es de 10 mm/min.

Calculamos la AEPT para cada flujo y para cada anión. Losresultados se muestran en la siguiente tabla. TABLA 2:

ANIÓN CLORURO (Cl- 10 ppm)

|Flujo real (mL/min) |Desplazamiento (mm) |tR (min) |W (min) |(N |H (mm) |
|1,572 |48 |4,8 |0,5 |1475 |0,16949 |
|1,324 |60 |6,0|0,6 |1600 |0,15625 |
|1,004 |78 |7,8 |0,8 |1525 |0,16393 |
|0,7095 |112 |11,2 |1,1 |1659 |0,15069 |
|0,3701 |196 |19,6|1,8 |1897 |0,13179 |

ANIÓN BROMURO (Br- 100 ppm)

|Flujo real (mL/min) |Desplazamiento (mm) |tR (min) |W (min) |(N |H (mm) |
|1,572 |62 |6,2 |0,7 |1255 |0,19920 |
|1,324 |78...