Cromatografía

6. Cromatografía de Líquidos
David J. Anderson
Larry D. Bowers


Resolución, eficiencia y velocidad de análisis
Resolución
Eficiencia cromatográfica
Velocidad de análisis
Cuantificación
Enfoques
Estandarización

Problemas generales en la elución
Selección de un tipo de cromatografía
Cromatografía de exclusión molecular
Cromatografía de intercambio iónico
Cromatografía deadsorción
Cromatografía de partición y de fase unida
Cromatografía de fase inversa
Cromatografía de pares iónicos
Cromatografía de afinidad
Cromatografía de enantiómeros

Avances recientes en materiales de empaque para HPLC
Avances sobre problemas con soportes de sílice
Medios de acceso restringido
Análisis de macromoléculas de alta eficiencia y alta velocidad

InstrumentaciónSistemas para el suministro de solventes
Sistemas para la introducción de la muestra
Columnas y conectores
Sistemas de detección

Aplicaciones


OBJETIVOS
§ Describir las ventajas del uso de la altura de pico o del área de pico para la cuantificación de un compuesto por cromatografía de líquidos.
§ Definir estandarización externa, estandarización interna, y adición de estándares;explicar la determinación de concentraciones desconocidas mediante cada uno de los procedimientos de estandarización; establecer los requerimientos para la selección y uso de un estándar interno.
§ Discutir los diferentes tipos de cromatografía de líquidos utilizados para separar moléculas y discutir los factores a considerar en la elección de la clase más apropiada.
§ Describir los diferentestipos de material de empaque que pueden obtenerse en el comercio, detallando las ventajas y desventajas de cada uno.
§ Esquematizar el sistema básico para cromatografía de líquidos en columna; enumerar los cuatro componentes básicos de un sistema de separación por cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC) y establecer la función de cada uno de ellos.
§ Enumerar los cuatro tipos de sistemasde detección utilizados en HPLC, y describir para cada uno el principio de operación, su uso en la práctica, y las ventajas y desventajas asociadas con su utilización.
§ Resumir las aplicaciones del HPLC en el análisis de compuestos clínicamente relevantes.


Términos clave

eficiencia Característica de una columna o material de empaque que describe la magnitud del ensanchamiento de lospicos cromatográficos. Mayores eficiencias llevan a picos cromatográficos más angostos.
efluente Fase móvil que ha dejado la columna.
eluado Mezcla de sustancias que han sido separadas en la columna y salen de ella.
elución en gradiente Sistema de elución en el que la composición del solvente es modificada
durante la corrida.
elución isocrática Elución con una mezcla de solventes decomposición constante.
eluyente Fase móvil.
fase estacionaria Parte del sistema de separación que se encuentra inmovilizado en la columna.
fase móvil Mezcla de solventes que es percolada a través de la columna.
fase normal Tipo de cromatografía en el que la fase móvil es menos polar que la fase estacionaria.
fase inversa Tipo de cromatografía en el que la fase móvil es más polar que lafase estacionaria.
fase unida Un material de empaque cromatográfico en el que la fase estacionaria está unida covalentemente a la superficie del soporte.
H Altura equivalente del plato teórico, AETP ("HETP", en inglés).
L Longitud de la columna cromatográfica, normalmente en milímetros.
m Velocidad del solvente en la columna (m = L/t0).
material de empaque Palabra referente almaterial que se coloca en la columna cromatográfica, y que consiste en la fase estacionaria y el soporte.
N Número de platos teóricos de separación de una columna cromatográfica.
permeabilidad Medida de la facilidad con que la fase móvil puede ser forzada a atravesar la columna.
Rs Resolución; grado de separación entre dos eluados.
soporte Partículas sobre las que se inmoviliza la fase...