Cuantificación De Antocianinas

Determinación del contenido de antocianinas
WROLSTAD, R. 1976. Color and Pigment Analyses in Fruit Products. Oregon State University Agricultural Experiment Station Bulletin 624.

Principio delmétodo

A pH 1,0 las antocianinas existen en forma altamente coloreada y a pH 4,5 están predominantemente en forma incolora. Una alícuota de una solución acuosa de antocianinas es ajustada a pH 1,0y otra a pH 4,5. La diferencia en la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción será proporcional al contenido de antocianinas.
Reactivos

• Buffer pH 4,5: 400 ml de acetato de sodio1M
+ 240 ml de HCl 1N
+ 360 ml de agua destilada

• Buffer pH 1,0: 125 ml de KCl 0,2 N
+ 385 ml de HCl 0,2 N

El pH de los buffers debe ser ajustado a medida que se requiera para obtenervalores de pH final de 1,0 y 4,5.

Materiales

• Pipetas 10 mL y 1 mL parciales
• Matraces 50 mL o 100 mL
• Probetas de 100 mL
• Cubetas para espectrofotómetro

Método
Para medir laabsorbancia, el jugo debe ser diluido con buffer. La dilución debe ser tal que la muestra a pH 1,0 tenga una absorbancia menor a 1,0 y 55 preferentemente en el rango de 0,4 a 0,6. El factor dedilución debe ser el mismo para ambas muestras (pH 1,0 y pH 4,5). Por ejemplo, tomar 10 ml de jugo y diluir a 50 ml (factor de dilución 5). Las muestras diluidas deben estar claras, sin turbidez ni sedimento.Cualquier sedimento debería ser removido centrifugando o filtrando la muestra. Si la muestra está libre de turbidez, la absorbancia a 700 nm debería ser 0. La turbidez puede ser corregida midiendo laabsorbancia a 700 nm y sustrayendo este valor de la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción (510-540).

Una vez diluidas las muestras se mide su absorbancia (pH 4,5 y pH 1,0) a lalongitud de onda de máxima absorción (entre 510 y 540 nm).

La determinación del contenido de antocianinas está basada en la Ley de Lambert-Beer (A=ε·C·L). A corresponde a la absorbancia que es...