Cuauhtemoc nava c.

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ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS

La capacidad antioxidante total se midió mediante la prueba de poder antioxidante por reducción férrica (FRAP) de acuerdo al método de Benzie y Strain (1999) . Alícuotasde 100 μl se tomaron por duplicado de cada muestra; a cada una se les agregó 1.5 ml de una mezcla formada por una solución amortiguadora de acetato 300 mM a pH 3.6, una solución acuosa de cloruroférrico hexahidratado (Fe (III)) 20 mM y 2,4,6-tripiridil-s-triazina (TPTZ) 10 mM (disuelto en HCl 40 mM), en una relación 10:1:1 respectivamente. Las muestras se incubaron a 37 °C por 10 min y seobtuvieron sus absorbancias a 593 nm. Las muestras y las soluciones con TPTZ se protegieron de la luz todo el tiempo. Para los cálculos se realizaron curvas patrón con soluciones acuosas de FeSO4heptahidratado (Fe (II)) a diferentes concentraciones (0.2-3.2 mM). Los resultados se presentan en nmol/ml .

La lipoperoxidación fue medida mediante la prueba de sustancias reactivas al ácidotiobarbitúrico (TBARS) de acuerdo al procedimiento descrito por Ohkawa y colaboradores (1979). Alícuotas de 100 µl se tomaron por duplicado de cada muestra y se les añadió 1 ml de una solución acuosa deácido tiobarbiturico al 0.8% y 2 ml de HCl al 20% ajustado a pH 2.5. Las muestras se mantuvieron en ebullición 60 min y se enfriaron en hielo durante 5 min. Posteriormente se les agregó 5 ml den-butanol y se agitaron vigorosamente para luego centrifugarse 10 min a 4000 rpm. Los sobrenadantes se leyeron a 532 nm para obtener las absorbancias. Los cálculos se hicieron con base a curvas patrónusando diferentes concentraciones (10-80 µM) de malondialdehído (MDA), obtenido a partir de la hidrólisis ácida de 1,1,3,3- tetraetoxipropano (Gutteridge 1975). Los resultados se reportan en nmol/ml.- Benzie I y J Strain. 1999. Ferric reducing/antioxidant power assay: direct measure of total antioxidant activity of biological fluids and modified version for simultaneous measurement of total...
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