Cuauhtemoc nava c.
Páginas: 2 (389 palabras)
Publicado: 10 de diciembre de 2010
ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS
La capacidad antioxidante total se midió mediante la prueba de poder antioxidante por reducción férrica (FRAP) de acuerdo al método de Benzie y Strain (1999) . Alícuotasde 100 μl se tomaron por duplicado de cada muestra; a cada una se les agregó 1.5 ml de una mezcla formada por una solución amortiguadora de acetato 300 mM a pH 3.6, una solución acuosa de cloruroférrico hexahidratado (Fe (III)) 20 mM y 2,4,6-tripiridil-s-triazina (TPTZ) 10 mM (disuelto en HCl 40 mM), en una relación 10:1:1 respectivamente. Las muestras se incubaron a 37 °C por 10 min y seobtuvieron sus absorbancias a 593 nm. Las muestras y las soluciones con TPTZ se protegieron de la luz todo el tiempo. Para los cálculos se realizaron curvas patrón con soluciones acuosas de FeSO4heptahidratado (Fe (II)) a diferentes concentraciones (0.2-3.2 mM). Los resultados se presentan en nmol/ml .
La lipoperoxidación fue medida mediante la prueba de sustancias reactivas al ácidotiobarbitúrico (TBARS) de acuerdo al procedimiento descrito por Ohkawa y colaboradores (1979). Alícuotas de 100 µl se tomaron por duplicado de cada muestra y se les añadió 1 ml de una solución acuosa deácido tiobarbiturico al 0.8% y 2 ml de HCl al 20% ajustado a pH 2.5. Las muestras se mantuvieron en ebullición 60 min y se enfriaron en hielo durante 5 min. Posteriormente se les agregó 5 ml den-butanol y se agitaron vigorosamente para luego centrifugarse 10 min a 4000 rpm. Los sobrenadantes se leyeron a 532 nm para obtener las absorbancias. Los cálculos se hicieron con base a curvas patrónusando diferentes concentraciones (10-80 µM) de malondialdehído (MDA), obtenido a partir de la hidrólisis ácida de 1,1,3,3- tetraetoxipropano (Gutteridge 1975). Los resultados se reportan en nmol/ml.- Benzie I y J Strain. 1999. Ferric reducing/antioxidant power assay: direct measure of total antioxidant activity of biological fluids and modified version for simultaneous measurement of total...
La capacidad antioxidante total se midió mediante la prueba de poder antioxidante por reducción férrica (FRAP) de acuerdo al método de Benzie y Strain (1999) . Alícuotasde 100 μl se tomaron por duplicado de cada muestra; a cada una se les agregó 1.5 ml de una mezcla formada por una solución amortiguadora de acetato 300 mM a pH 3.6, una solución acuosa de cloruroférrico hexahidratado (Fe (III)) 20 mM y 2,4,6-tripiridil-s-triazina (TPTZ) 10 mM (disuelto en HCl 40 mM), en una relación 10:1:1 respectivamente. Las muestras se incubaron a 37 °C por 10 min y seobtuvieron sus absorbancias a 593 nm. Las muestras y las soluciones con TPTZ se protegieron de la luz todo el tiempo. Para los cálculos se realizaron curvas patrón con soluciones acuosas de FeSO4heptahidratado (Fe (II)) a diferentes concentraciones (0.2-3.2 mM). Los resultados se presentan en nmol/ml .
La lipoperoxidación fue medida mediante la prueba de sustancias reactivas al ácidotiobarbitúrico (TBARS) de acuerdo al procedimiento descrito por Ohkawa y colaboradores (1979). Alícuotas de 100 µl se tomaron por duplicado de cada muestra y se les añadió 1 ml de una solución acuosa deácido tiobarbiturico al 0.8% y 2 ml de HCl al 20% ajustado a pH 2.5. Las muestras se mantuvieron en ebullición 60 min y se enfriaron en hielo durante 5 min. Posteriormente se les agregó 5 ml den-butanol y se agitaron vigorosamente para luego centrifugarse 10 min a 4000 rpm. Los sobrenadantes se leyeron a 532 nm para obtener las absorbancias. Los cálculos se hicieron con base a curvas patrónusando diferentes concentraciones (10-80 µM) de malondialdehído (MDA), obtenido a partir de la hidrólisis ácida de 1,1,3,3- tetraetoxipropano (Gutteridge 1975). Los resultados se reportan en nmol/ml.- Benzie I y J Strain. 1999. Ferric reducing/antioxidant power assay: direct measure of total antioxidant activity of biological fluids and modified version for simultaneous measurement of total...
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