Cultivo in vitro de canabis sativa

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Cultivo in vitro

Hola, ahi van mis últimas experiencias con el cultivo in vitro casero. Con este tema me gustaría aclarar que éstas técnicas no tienen porqué quedar relegadas únicamente a loslaboratorios, y animar a todos los que nos encantan la ciencia y las plantas a ponerse con ello. Ahí va..

Material:

-Pinzas
-Bisturí
-Mechero
-Agua destilada
-Lejía
-Botes de cristal ocontenedores de polipropileno (PP5)
-pHmetro
-KOH (u otro producto para subir el pH)
-Báscula
-Agar
-Medio de cultivo (MS)
-Reguladores de crecimiento (auxinas y citoquininas)
-Azúcar
-Olla a presión-Pipeta o jeringa para medir pequeños volúmenes.
-Jarra (para medir volúmenes)

Y lo más importante, una cámara que nos permita trabajar en un ambiente estéril. Hay varias opciones en éste punto:-Glovebox: Es la opción más barata, por unos 20-40 euros podemos fabricarla, y por un poco más le podemos poner una bombilla UVC para esterilizar superficies

- Flowhood: La construí siguiendoun manual en internet. Sale un poco más cara, ya que cuenta con un filtro HEPA y un extractor adecuado para conseguir un flujo laminar, pero te ofrece una comodidad digna de una cabina de laboratorio.Tutorial de construcción: http://www.fungifun.org/English/Flowhood#construction

Medio de cultivo

El medio de cultivo utilizado es el Murashige & Skoog, y para el buen desarrollo de losexplantos el pH fue corregido a 5,8 con KOH (durante la esterilización desciende unos 0,3 puntos) se le añadieron 15 g/L de dextrosa y 10 g/l de agar. Además, se le añadió la siguiente concentraciónhormonal:

-Kinetina (2 mg/l) ------- (Citoquinina)
-AIA (0,2 mg/l) ---------- (Auxina)

La concentración hormonal ideal varía mucho entre especies. Para empezar utilicé una regla habitual para elcultivo de yemas que suele ser usar 10 veces más citoquininas que auxinas. Como el material vegetal era relativamente viejo usé una concentración que me pareció bastante alta de citoquininas (2mg/L)....
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