Cultivo in-vitro vegetal

Cultivo in-vitro vegetal
Desarrollo aséptico de protoplastos,
células , tejidos u órganos vegetales
en un medio de cultivo , tan definido
como sea posible y que se mantenga
bajo condiciones ambientales
controladas

Pasos para iniciar un cultivo in vitro
1- elección del explanto
2-Acondicionamiento y esterilización
3-Implantación en el medio de cultivo
4-Incubación

ExplantoInóculo

Trozo de material vegetado de
una planta madre a ser
cultivado
ó
Célula, tejido u órgano vegetal
usado para iniciar un cultivo
in-vitro
Material vegetal a subcultivar
que ya está en cultivo in-vitro

Explanto
•La elección del
explanto
depende del
propósito del
cultivo.
Por ejemplo las
yemas axilares y
los meristemas
son apropiados
para
micropogación

Explantos• Partes de órganos
– Hojas
– Tallos
– Raíces
– vástagos
– Yemas axilares
– Semillas
– Hypocótilos
• Tipos celulares específicos
– Polen
– Endosperma

Elección del explanto

• Fácil de esterilizar
• Juvenil
• Que responda al cultivo

•Las partes aéreas son mas limpias que las subterráneas
•Cuanto más pequeño sea el explanto más posibilidades
de evitar problemas fitopatológicos(virus, microplasmas,
bacterias), pero disminuye su posibilidad de crecimiento
•Los tejidos internos suelen estar menos contaminados
que los más externos
•Explantos similares puede reaccionar de forma diferente
por influyen:
•Su localización en la planta madre
•Su condición de juvenilidad

Juvenil es diferente de jóven
Jóven se refiere a la edad, es el opuesto de viejo.
Juvenil es elopuesto de adulto
Puede estar referido a:
•Al período de desarrollo del vegetal en el cual el
órgano se inició (las yemas latentes en la base de
un tallo se iniciaron en los seedling)
•La proximidad al sistema radicular
La iniciación de cultivos a partir de explantos no
juveniles suele ser problemática

Polaridad
Un explanto en cultivo puede presentar polaridad en
cuanto a laproliferación celular y /o a la morfogénesis
Esto puede estar relacionado con su posición y/o
orientación en la planta madre o con su orientación
dentro del recipiente de cultivo

Example of polarity:
Shoot initiation happens only at one
side of the leaf of Saintpaulia

asepsis

Evitar contaminación utilizando
métodos de esterilización

axénico

Libre de asociación con otros
organismosvivos
Matar o inhibir microorganismos o sus
esporas con calor, filtros, químicos u
otros sistemas

esterilización

Los cultivos de tejidos son técnicas asépticas

Esterilización
• Bacteria and fungi will overgrow the explant on
the medium unless they are removed
• Pre-treatments to clean up the explant
• Detergents
• Sterilants and Antibiotics

Pre-treatments
• Transfer plantsto a greenhouse to reduce
endemic contaminants
• Force outgrowth of axillary buds
• Washing removes endemic surface
contaminants

Surface sterilization of plant material
Base protocol
1. Wash explants in a mild detergent before treatment with the
disinfecting solution (Herbaceous material may not require
this step)
2. Rinse explants thoroughly under running tap water for 10-30minutes
3. Submerge explants into the disinfectant solution. Seal bottle
and gently agitate
4. Under sterile conditions, decant the solution and rinse
explants several times with sterile distilled water

Surface sterilization of plant material
COMMONLY USED DISINFECTANTS
FOR PLANT TISSUE CULTURE

Disinfectant

Concentration (%)

Exposure (min)

Calcium hypochlorite

9-10

5-30Sodium hypochlorite*

0.5-5

5-30

Hydrogen peroxide

3-12

5-15

Ethyl alcohol

70-95

0.1-5.0

Silver nitrate

1

5-30

Mercuric chloride

0.1-1.0

2-10

Benzalkonium chloride

0.01-0.1

5-20

*Commercial bleach contains about 5% sodium hypochlorite, and thus may be
used at a concentration of 10-20%, which is equivalent to 0.5-1.0% sodium
hypochlorite....