Cultivo

[Escribir el título del documento]

[Escribir el subtítulo del documento]

[Seleccionar fecha]

Martes 11 de octubre de 2011

Introducción
De origen danés y graduado en Medicina en el año 1878. Hasta 1885 estuvo realizando diversos viajes por Europa formándose en Bacteriología y Farmacología. En 1882 Paul Ehrlich publicó un método para colorear el bacilo de la tuberculosis: estapublicación fue un aliciente para que Gram comenzara sus experimentos con la coloración de las bacterias. Mientras se encontraba en uno de sus viajes en Berlín, intentó establecer la diferencia entre dos bacterias causantes de neumonía: Klebsiella pneumoniae y el Neumococo
La tinción diferencial requiere más de un tipo de colorante y se utiliza para distinguir entre varios tipos de células bacterianas.Una tinción diferencial típicamente consiste de tres pasos principales: primero un colorante primario, el cual se utiliza para teñir a todas las células en la tinción; enseguida un paso de decoloración, el cual remueve el colorante solo de ciertos tipos de células y finalmente un colorante de contraste, el cual tiñe las células recién decoloradas pero no tiene efecto sobre las células queaún retienen el colorante primario
La tinción propuesta por el médico danés Christian Gram en 1884, es una de las tinciones diferenciales más utilizadas en bacteriología, que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas. La reacción de la tinción de Gram se basa en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de estasbacterias. Las bacterias Gram positivas tienen muchas capas de peptidoglucano, las cuales a su vez, sostienen moléculas de ácido teicoico. El ácido teicoico reacciona con el cristal violeta y el yodo utilizado en este proceso de tinción. Un complejo de las moléculas cristal violeta-yodo-ácido teicoico es muy difícil de remover. Como la pared celular de las células Gram positivas retiene estoscompuestos, es más difícil decolorar una célula Gram positiva que una Gram negativa. Una mezcla de alcohol remueve el cristal violeta de la célula Gram negativa, pero no de la Gram positiva. Esta mezcla de alcohol también disuelve mucho de la capa exterior de lipopolosacárido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo cual acelera la remoción del colorante primario cristal violeta de estascélulas.

Cuando otro colorante, usualmente safranina, se añade, las células Gram positivas siguen de color azul-violeta mientras que las Gram negativas absorben el color rojizo de la safranina. Al final del procedimiento de tinción, las células Gram positivas serán del color del cristal violeta, o colorante primario, y las células Gram negativas serán del color de la safranina que es elcolorante de contraste.

Objetivos:
1. Clasificar algunas especies bacterianas en Gram positivas o Gram negativas de acuerdo a la tinción de Gram.
2. Comprender la importancia que tienen estas tinciones para la caracterización e identificación de las bacterias
Material por equipo:
- Microscopio óptico
- Colorantes para tinción de Gram
- 1 mechero
- asa microbiológica
- Aceite de inmersión
-Plumón indeleble
- Cultivos bacterianos (Granulo negro y blanco y bacterias de reactor acido génico y reactor desnitrificante)
Procedimiento
1.- De una mezcla de gránulos blancos y negros se toma una muestra de cada uno, después se distribuyen en los potadores de objetos y se secan poniéndolos cerca del mechero de bunsen cuidando de que el portaobjetos no toque la flama del mechero.
Ya que lamuestra está totalmente seca
2.- Agrega colorante violeta (cristal violeta de Genciana) y esperar 1 minuto y lavar con agua el portaobjetos para retirar el colorante
3.- Agregar colorante lugol para Gram durante 1 minuto y lavar con agua
4.- Agregar colorante alcohol acetona por 10 segundos y lavar con agua
5.-Agregar colorante safranina durante 30 segundos, dejar reposar por 1 minuto y...