Cultivoinvitro de crisantemo

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Cultivo in Vitro de Crisantemo: Desinfecion y Siembra
1. PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
1.1.INICIACION

Se toma un Erlenmeyers, un vaso de precipitación o una olla de acero inoxidable de 1 litro y se lava con agua destilada el interior. Para preparar 1 litro de medio de iniciación, se agregan 200 ml de agua y las soluciones madres en la siguiente proporción adecuada:
MS(Macronutrientes): xxx
ms (Micronutrientes): xxx
inositol: xxx
vitaminas: xxx
quelato de hierro: xxx
hormonas: xxx
azucar: xxx
Gel: xxx
Foto 1. Preparacion del medio del cultivo. der.) agregacion de las soluciones madres. izq.) Virtiendo el Inositol en el medio de cultivo.

Se agita y se enrraza a 990 ml. Con la ayuda de una tira del test de Ph se ajusta el mismo a 5.5 (Se regula el ph con HCLdiluido con agua destilada). Se adiciona el gel, se tapa y se lleva a ebullición.

Foto 2. der) inmersion de la tira de test de pH. Izq) verificacion del pH.

Cuando ha hervido, se retira del fuego y y se deja reposar unos 15 minutos. Después se dispensan 20 ml. en frascos con capacidad de 100 ml. Se tapa la boca del frasco con redondeles de papel aluminio.
Foto 3. Proceso de dispensamientodel medio de cultivo en frascos.

1.2. ESTERILIZACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.

Se colocan los frascos dentro de el autoclave. Se tapa asegurando bien el autoclave y con la ayuda de un fosforo se enciende la hornilla, con una llama media y se lleva al fuego el utoclave.

Cuando la flecha del manómetro indica que se llego a 15 libras de presión, se trata de estabilizarlo ahí durante 5minutos y luego se lo retira del fuego. Antes de abrir el autoclave, hay que esperar a que el manómetro indique “0”.
Foto 4. der) colocacion de los frascos con medio de cultivo en el autoclave. Izq) Esterilizacion del medio de cultivo en el autoclave.

Cuando la presión ha descendido totalmente, se lleva el autoclave a la cámara de flujo laminar para abrirla

2.MANEJO DEL MATERIAL VEGETAL
2.1.RECOLECCIÓN Y DESINFECCIÓN

Se seleccionan las camas donde se recolectaran los esquejes; estas camas deben tener plantas sanas.
Foto 5. Plantas madres de crisantemo.

En horas de la mañana se cortan esquejes de 15 cm., los que son transportados al laboratorio en un recipiente con una franela encima.

En el laboratorio se los coloca bajo el chorro de agua para evitar el estrés del esqueje.Con la ayuda de una tijera, se cortan las hojas, dejando el esqueje sin hojas, pero con parte de la nervadura que envuelve a la yema
Foto 6. Der) Recepcion de los esquejes de crisantemo en el laboratorio. Cent)Esqueje de crisantemo. Izq) Corte de las hojas.

Con la ayuda de un cedazo, se dejan los esquejes sin hojas a chorro continuo por espacio de 5 minutos.

Se cortan los esquejes muygrandes y se introducen en un recipiente con agua destilada para enjuagarlos.
Foto 7. Esquejes de crisantemos listos paar empezar la desinfeccion.

Se vuelve a colocar agua destilada hasta el nivel que cubra a los esquejes y se agregan 0.2 ml. de phyton. Los dejamos reposar 5 min y luego los lavamos con agua destilada.

Se prepara una solución de 20% hipoclorito de sodio y 80% agua destilada, yse vierte en el recipiente con los esquejes y se tapa la boca del recipiente con una redondéla de aluminio. Se dejan los esquejes en esta solución por 20 minutos y se los lleva a la cabina de flujo laminar.
Foto 8. Esquejes de crisantemo inmersos en una solucion de agua con phyton.

2.2. SIEMBRA INICIAL

Se preparan y esterilizan previamente las cosa que se utilizaran en la cámara de flujolaminar (papel, algodón, bisturí, agua destilada, medios de cultivo).

Se retira la tapa de la cabina de flujo laminar y se enciende la misma. Se limpian los frascos con medio de cultivo para ingresarlos a la cabina (la limpieza es con alcohol antiséptico y algodón esterilizado.
Foto 9. Der) material esterilizado previamente. Izq) atomizacion de alcohol en la mesa de trabajo.

Se limpia...
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