Cultivos primarios: aislamiento de linfocitos t y observacion de cromosomas

Resumen

El cultivo celular se realiza en medios artificiales preparados mediante la mezcla de componentes purificados o de soluciones orgánicas complejas, en el interior de instrumentos que mantienen las condiciones físico-químicas adecuadas y sobre soportes o recipientes que los contienen y aíslan del medio exterior, el nuestro es un cultivo primario simple, no exige muchos requerimientos;un medio de cultivo RPMI 1640(ideal para cultivos células humanas o tejidos aislados), una incubadora a 37ºC y un frasco de cultivos de vidrio. Mediante el cultivo de linfocitos en sangre periférica y utilizando técnicas especiales, es posible observar y analizar los cromosomas con el microscopio. Se estimula el crecimiento de los linfocitos con el uso de fitohemaglutinina. la observación de loscromosomas es útil para su estudio citogenético pues los cromosomas no solamente tienen un número constante en cada especie, sino además presentan estructura y morfología definidas que se pueden distinguir mediante tinciones o técnicas de bandeo cromosómico. Este experimento es ideal pues es barato y el tiempo de realización es relativamente corto.

Palabras Clave: Cultivo primario, cromosomas,linfocitos, ____________________________________________________________

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1. 1. Introducción

Un cultivo de células aisladas de algún órgano o de un líquido fisiológico mediante disgregación mecánica o enzimática es un cultivo celular primario. Los cultivos primarios tienen características especiales: conservan lamorfología de las células del órgano del que fueron aisladas, sus cromosomas tienen un número diploide (2n), su crecimiento in vitro es limitado, hay inhibición por contacto, tienen varios tipos de células, y permiten su propagación, aumentando notablemente su población, población que a lo largo del tiempo pierde la heterogeneidad celular inicial, haciéndose uniforme, predominando aquella especie que tengauna mayor tasa de crecimiento. [3]. Los cultivos secundarios son si uno o varios tipos de células de un cultivo primario se re-siembran (subcultivo). Los cultivos primarios son especialmente útiles para análisis de cromosomas “in vitro”, análisis de alteraciones cromosómicas, numéricas, estructurales, diagnóstico y terapia citogenética.
Un paso básico para realizar un cultivo primario esindividualizar las células de la muestra, intentando dañarlas lo menos posible, lo que da como resultado una suspensión celular que luego puede ser cultivada en un medio liquido o solido a la conveniencia del investigador[1]. A veces se requiere estimular el crecimiento de las células con alguna sustancia como por ejemplo el PHA que es una proteína (lectina). Las lectinas son proteínas que se unen acarbohidratos con una elevada especificidad para cada punto distinto. Su principal papel está en los fenómenos de reconocimiento. Por ejemplo, algunas bacterias utilizan lectinas para acoplarse a las células de organismos hospedadores durante la infección. La PHA es reconocida por su capacidad para aglutinar eritrocitos, leucocitos entre otros. Además estimula la mitosis de linfocitos T y es estacaracterística la que le da su principal aplicación.

El material genético nuclear descrito desde el punto de vista molecular, lo constituyen los cromosomas, estos son visibles al microscopio de luz común. El análisis de las características de los cromosomas es el objeto de estudio de la Citogenética [2]. El estudio cromosómico aporta información valiosa acerca de la constitución genética de unser vivo pues cada cromosoma normal tiene un morfología y un tamaño muy constantes. Cada cromosoma posee una morfología tan típica como la que tiene un eritrocito o cualquier órgano macroscópico, dicha morfología refleja la constitución del cromosoma a partir de una molécula específica de ADN (la cromática de ese cromosoma) en humanos por ejemplo la longitud del cromosoma mayor es de 10૫l y la...