Curva de calibración por fotocolorimetria

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

CURVA DE CALIBRACIÓN POR FOTOCOLORIMETRIA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
MEDELLIN
2010-02-24

OBJETIVOS

*Conocer los principios básicos de colorimetría.*Hallar concentraciones de muestras de proteína.

*Determinar el espectro de absorción de un compuesto determinado.

* Realizar curva de calibración a partir de una muestra de albumina.METODOLOGIA

Reactivos y Materiales:

• Fotocolorímetro
• Reactivo de Biuret
• Solución de albumina (C=3mg/ml)
• Solución salina al 0.9%
• Muestras problema: Caseína, Suerosanguíneo, gelatina

Procedimiento:

RESULTADOS

1. Espectro de absorción de la Albumina

Tabla 1

|Espectro de absorción de la albumina |
|λ(nm) |ABS |
|420|0,161 |
|440 |0,172 |
|460 |0,181 |
|480 |0,282 |
|500|0,386 |
|520 |0,478 |
|540 |0,52 |
|560 |0,512 |
|580 |0,466 ||600 |0,399 |
|620 |0,326 |

Se puede observar que la longitud de onda de máxima absorbancia para esta solución es de 540nm. Esta longitudde onda es la que se utilizara en la preparación de la curva de calibración.

2. Curva de calibración

Concentración de la albumina: [pic] ( [pic]* [pic]

Tabla 2

Tubo |Solución patrón(ml) |solución problema (ml) |Solución Salina (ml) |Reactivo de Bureta (ml) |Absorbancia |Concentración mg/ml | |Blanco |- |- |2.0 |4.0 | | | |1 |0.1 | |1.9 |4.0 |0,015 |0,0075 | |2 |0.3 | |1.7 |4.0|0,048 |0,225 | |3 |0.5 | |1.5 |4.0 |0,091 |0,375 | |4 |0.7 | |1.3 |4.0 |0,144 |0,525 | |5 |0.9 | |1.1 |4.0 |0,153 |0,675 | |6 |1.2 | |0.8 |4.0 |0,233 |0,9 | |7 | |0.5 |1.5 |4.0 |0,084 |0,33 | |8 |...