Definición y pasos de la clonación molecular

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CLONACIÓN MOLECULAR
Definición de clonación molecular:
Proceso que comporta la separación de un gen especifico o de un fragmento de ADN de un cromosoma mucho mayor y su unióna una pequeña molécula de ADN portador, para después replicar este ADN modificado miles o millones de veces, mediante el aumento del número de células y la creación demúltiples copias del ADN clonado en cada célula.
Pasos que se llevan a cabo en la clonación de una secuencia de ADN:
Fragmentación: Inicialmente, el ADN de interés necesita serfragmentado para proveer un segmento relevante de ADN de un buen tamaño. Unas enzimas llamadas endonucleasas específicas de secuencia hacen las veces de tijeras moleculares.
Ligación:Un procedimiento de ligación se emplea cuando el fragmento de interés se inserta en un vector, que es una molécula de ADN capaz de replicarse en una célula y servir comovehículo para transferir a esa célula el ADN que se le ha insertado. Una enzima llamada ligasa une dicho vector y el ADN que se desea clonar. 
Transfección: Después de la ligación,el vector con el gen de interés se transfecta a una célula huésped que proporciona la maquinaria enzimática necesaria para la replicación.. 
Selección: Finalmente, las célulastransfectadas se cultivan. Como este procedimiento actualmente se considera de baja eficiencia, se deben identificar las colonias de células que han sido exitosamentetransfectadas con el vector que contiene el gen deseado. 
Los vectores de la clonación moderna incluyen marcadores de resistencia antibiótica, los cuales les permiten crecer sólo a lascélulas en las que el vector ha sido transfectado. Además, los vectores de clonación pueden contener marcadores de selección coloridos que proveen una visión azul/blanca
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