derecho

INDICE

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1. RESUMEN

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2. INTRODUCCIÓN

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2.1. La industria de celulosa Kraft en Chile

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2.2. La materia prima y proceso productivo Kraft

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2.3. Efluentes, los tratamientos empleados para su depuración y la

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gestión ambiental de la industria
2.4. Los compuestos extractivos de la madera: Los fitosteroles

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2.5. Las alteraciones endocrinasprovocadas por la exposición a los

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CDE.
2.6. Modo de acción de los compuestos disruptores endocrinos y sus

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propiedades físico-químicas
2.7. Saccharomyces cerevisiae y la tècnica YES (Yeast Estrogen Assay)

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(YES)
3. HIPÓTESIS DE TRABAJO

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4. OBJETIVOS

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4.1. Objetivo general

26

4.2. Objetivos específicos

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5. METODOLOGÍA

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5.1. Actividadestrogénica

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5.1.1. Cepa de levadura recombinante

27

5.1.2. Preparación de las soluciones del medio de cultivo

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5.2. Crecimiento de levadura recombinante: Análisis previos

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5.3. Cultivo de levadura

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5.3. Preparación de soluciones para el ensayo

32

1

5.4.

Preparación

de

solución

de

Rojo

clorofenol

β-D-

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galatopiranosido (CPRG,reactivo cromogénico)
5.5. Preparación de las diluciones para el ensayo

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5.6. Técnica “Yeast Estrogen Assay” (YES)

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5.7. Análisis de resultados

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6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

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6.1. Crecimiento de levadura recombinante: Análisis previos

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6.2. Ensayo Yeast Estrogen Assay (YES)

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7. CONCLUSIONES

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8. REFERENCIAS

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2

INDICE DE TABLASTabla I. Plantas de celulosa Kraft operantes, actualmente, en Chile así

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como también se ven detalladas el tipo de celulosa que producen y el
río al cual vierten sus Riles
Tabla II. Potenciales contaminantes provenientes de la industria de

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celulosa
Tabla III. Anomalías endocrinas ocasionadas por la exposición a los

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efluentes de celulosa Kraft o a algún compuestoespecifico presentes en
ellos
Tabla IV. Propiedades físico-químico de compuestos presentes en el

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efluente de celulosa Kraft
Tabla V. Velocidad de crecimiento especifico del biosensor a distintas

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temperaturas, mediante ala ecuación 2
Tabla VI. Concentraciones efectivas (EC50) obtenidas para el EE2,

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Estigmasterol y β-sitosterol a través de la aplicación de unaregresión
logarítmica a las curvas dosis respuestas, entregadas por el programa
Origin versión 6.0
Tabla VI. Potencia relativa estrogénica para cada fitoesterol con

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respecto al patrón

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INDICE DE FIGURAS

Figura 1. Estructuras químicas de algunos fitosteroles y ácidos

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resínicos detectados en los efluentes de celulosa Kraft
Figura 2. Lac-Z: Gen reportero; hER:Gen receptor de estrógenos

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humanos; ERE: Elemento de respuesta estrogénica; CPRG: Clorofenol
rojo-β-D-galactopiranosido (Reactivo cromogénico)
Figura 3. Balanza analítica marca Precisa, modelo XB 120 A

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Figura 4. Peachímetro c/ electrodo Sentix 41, Marca WTW, modelo

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Inolab pH level 1
Figura 5. Espectrofotómetro marca Spectronic Unicam, modelo Génesis

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10UVFigura 6. Cámara de Flujo Laminar marca Misonix Modelo PCR 6

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Figura 7. Agitador orbital c/regulación de tiempo y Tº, marca LAB-LINE,

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modelo Enviromental Shaker
Figura 8. Estufa marca Termo Areus, modelo B6

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Figura 9. Lector de placas EL x 800, BioTex

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Figura 10. Gráfico que demuestra los resultados obtenidos de los

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cultivos de levadura, realizados condistintas cantidades de inóculos
(μL), incubados a distintas temperaturas por un tiempo que va desde las
0 a 192 h
Figura 11. Velocidad específica de crecimiento del biosensor a distintas

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temperaturas
Figura 12. Placas que resultaron tener resultados erróneos (coloración

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roja) puesto que daban positivo al compuesto control (negativo o

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blanco), el cual en este trabajo...