Desarrollo de inoculo

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DESARROLLO DEL INÒCULO Y CULTIVO CELULAR POR LOTES

Resumen

En el presente trabajo reporta los parámetros cinéticos (biomasa, productividad, tiempo, etc.) dentro de un cultivo celular. Se a desarrollado el cultivo celular con Kluyveromyces marxianus, partiendo desde su manipulación en su estado en forma de cepa refrigerada. El cual ha seguido una serie de procedimientos secuencialestales como inoculación en agar (solido de mantención), su activación en el cual se utilizo sacarosa, extracto de levadura y sales en un régimen de pH de 6.0, y finalmente su medio de fermentación la cual fue un medio complejo debido a que se experimento con extracto de yacon, extracto de levadura, peptona y K2HPO4, además de regular el medio con acido ortofosorico para obtener un pH de 5.5.El trabajo se trato entonces de observar y comparar como se va produciendo el crecimiento celular con los nutrientes exactamente necesarios para tal acción y al mismo tiempo como se comporta la producción del producto, el sustrato en este caso debido a que se utilizo extracto de yacon no se pudo determinar debido que la fructosa que es la sustancia que contiene no es un azúcar reductor. Loque nos quedo por determinar solo crecimiento de biomasa mediante absorbancia y la producción de proteína mediante el método Bradford.

Estos dos aspectos (crecimiento de biomasa, comportamiento del pH y producción de proteína) evaluados en un determinado tiempo y expresados en gráficas además de ser comparados en una curva de calibrado para ambos casos, nos darán información sobre elmicroorganismo tales como el rendimiento en proteínas, velocidad de crecimiento máximo y la productividad.

I. INTRODUCCIÓN

En la actualidad muchos de los alimentos son obtenidos gracias al manejo y conocimiento del crecimiento de microorganismos. Resulta entonces importante el conocimiento de las condiciones en que estos microorganismos puedan optimizar sus productos. Para ello lapreparación de medios de cultivo para estos microorganismos es un buen punto de partida para conocer sobre su comportamiento así como también el seguimiento de la cinética nos proporciona datos mucho más prácticos y exactos sobre la velocidad y características del crecimiento del microorganismo tratado.

La preparación de medios para el desarrollo de procesos de fermentación es una etapafundamental para asegurar la productividad de los mismos.

Los componentes de los medios constituyen los efectores externos de naturaleza química que desempeñan un rol esencial en los procesos ya que deben cumplir con los requerimientos del crecimiento y de formación de productos y además suministrar energía para la síntesis de metabolitos y para el mantenimiento celular.
No obstante que losmicroorganismos varían considerablemente respecto de los nutrientes que pueden necesitar

Es así que para esta práctica hemos centrado nuestra atención en el tratamiento de un microorganismo (Kluyveromyces marxianus NRRL Y-7571), iniciando desde su siembra partiendo desde su estado en cepa liofilizada, para luego sembrarlo en medio rico procurando su rápida activación, para que luego de undeterminado tiempo podamos sembrar la bacteria pero en un medio mínimo; es decir con los mínimos requerimientos; en el cual es más factible determinar la cinética de crecimiento.

II. OBJETIVO GENERAL

Diseñar y realizar una experiencia de cultivo celular por lotes en matraces empleando una cepa de Kluyveromycesmarxianus NRRL Y-7571.

III. OBJETIVOS ESPECIFICOS

• Preparacióndel medio de cultivo
• Activación celular y desarrollo del inóculo.
• Determinar de la cinética de crecimiento de la biomasa
• Determinación de la cinética de consumo de la fuente de carbono
• Determinación de la cinética de producción de proteínas
• Determinación del µM y los rendimientos del nutriente limitante en células y en proteínas, además de las...
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