Desnaturalizacion de proteinas

DESNATURALIZACIÓN DE PROTEINAS

EDISON ARIAS
HERNAN BENITEZ
JULIETH GARCES
NELLY LESMEZ

TUTORA: ELVIRA TIRADO

INSTITUTO DE PROYECCION REGIONAL Y EDUCACIONA DISTANCIA
UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER (UIS)
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
6 DE NOVIEMBRE DE 2009
BUCARAMANGA
2009

OBJETIVOS

Identificar los diferentes factores que afectan la estabilidad de las proteínas(desnaturalización)
- Conocer algunas de las pruebas más comunes en la identificación de las proteínas

* Observar e identificar los procesos de desnaturalización por calor, desnaturalización por pH extremos, desnaturalización por metales pesados, precipitación por reactivos, ácidos y la determinación cualitativa de proteínas en la orina.

* Determinar los fenómenos de desnaturalización que sepresentan en la albumina, con los respectivos reactivos.

FUNDAMENTO TEÓRICO

La conformación fisiológica activa de una proteína se denomina Estructura Nativa, en donde las fuerzas encargadas de mantener la conformación incluyen enlaces covalentes, puentes salinos y puentes de hidrogeno.
Cuando las proteínas se exponen a pH extremos, como el pH del estomago (pH= 1,5), a altas temperaturas (60º omás), se pierden a confirmación nativa, produciendo cambios estructurales.
La desnaturalización es la perdida de la conformación nativa, se rompen las fuerzas que hay entre cadenas y los puentes de hidrogeno.
La desnaturalización puede producirse por efecto de numerosas causas:

* FÍSICA: Entre ellos se incluyen e calor, la presión, el congelamiento, rayos x, rayos ultravioleta yultrasonido.

* AGENTES QUÍMICOS: Destrucción de puentes de hidrogeno en la proteína como son los pH extremos, solventes orgánicos y sales.

* AGENTES BIOLÓGICOS: Como las enzimas proteolíticas.

Las proteínas desnaturalizadas tienen la misma conformación, abierta y una interacción máxima con los respectivos disolventes, por lo que una proteína soluble en agua se desnaturaliza se haceinsoluble en ella y se precipita; adicionalmente se pueden presentar cambios en el grado de hidratación y en su índice de refracción.
La desnaturalización no supone la separación de la estructura proteica primaria; por consiguiente, a veces es posible invertir la desnaturalización eliminando el agente causal.

MATERIALES Y REACTIVOS

1. Tubos de ensayo (8)
2. HNO3 CONCENTRADO
3. NaOH 10%4. HCl 10%
5. Reactivo tanrred
6. Sulfato de cobre
7. Acido pícrico
8. Vaso de 250 mL.
9. Gradilla
10. Acido nítrico
11. Acido tricloroacético
12. Placa de calentamiento
13. Albumina
14. Agua

PROCEDIMIENTO

* DESNATURALIZACIÓN POR CALOR

Colocar los tubos en un baño de agua hirviendo durante 10 minutos y observar. Enfriar y observar cada uno.Observar a temperatura ambiente
Agregar 5 gotas de H2O al 10%
Agregar 5 gotas de NaOH al 10%
Agregar 5 gotas de HCl al 10%
Tubo 3.
Agregar 2-3 ml. De solución de albumina.
Tubo 2.
Agregar 2-3 ml. De solución de albumina.
Tubo 1.
Agregar 2-3 ml. De solución de albumina.





* DESNATURALIZACIÓN POR PH EXTREMOS

Agregarlentamente por las paredes del tubo 2 ml de Acido Nítrico hasta formar 2 fases
Tubo 1.
Agregar 2-3 ml de solución de albumina

Agitar, mezclar, observar y anotar los cambios.



* DESNATURALIZACIÓN POR METALES PESADOS


Agregar 5 gotas de solución de Sulfato de Cobre (CuSO4)
Tubo 1.
Agregar 2-3 ml de solución de albumina

Añadir un exceso de 2 gotas de Sulfatode Cobre. Agitar y observar.
Agitar y observar

* PRECIPITACION POR REACTIVO ÁCIDO
Añadir a cada tubo 5 gotas de NaOH
Observar
Agregar 5 gotas de Acido Tricloroacético
Agregar 5 gotas Acido Pícrico
Tubo 2.
Agregar 2-3 ml de solución de albumina

Tubo 1.
Agregar 2-3 ml de solución de albumina



* DETERMINACION CUALITATIVA DE PROTEINAS EN...