Desnaturalizacion

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  • Publicado : 14 de mayo de 2011
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El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.

Está hecho dehidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando secombina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Se usa normalmente en el ensayo deBiuret, un método colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el iónCu2+).
Procedimiento

Se toma un tubo de ensayo y se colocan tres centímetros cúbicos de albúmina de huevo, es decir la parte transparente.
Se añaden 2 centímetros cúbicos de solución dehidróxido de sodio al 20%.
Más adelante se agregan 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%.
El resultado es que la mezcla se torna de color violeta, indicando la presencia deproteínas.
La reacción o prueba de BIURET es un método que detecta la presencia de compuestos con dos o más enlaces peptídicos y, por tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos.
Elreactivo del biuret (sulfato de cobre en una base fuerte) reacciona con los enlaces del péptido y cambia el color cuando entra en contacto con otra sustancia, tornándose VIOLETA. Mientras más cantidad deproteína esté presente en la solución, más oscuro es el color.
Por ejemplo cuando se calienta la urea a 180 celsius, se descompone transformándose en un compuesto llamado "biuret", el cual enpresencia de Cu2+ en solución alcalina forma un complejo color violáceo ya que reconoce los enlaces peptídicos de las proteínas, no es específico para identificación de proteínas con dos o más enlaces...
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