Deteccion de pseudomonas

Detección de Pseudomonas aeruginosa Productora de Metalo-Beta-Lactamasas
Pseudomonas aeruginosa, productora de metalo-beta-lactamasas (MBL), se identificó por primera vez en Japón en 1991. Desde entonces, el fenómeno se observó en otras partes del mundo. Las cepas de P. aeruginosa MBL positivas pertenecen a la clase B Ambler y tienen la capacidad de hidrolizar una amplia variedad de agentesbeta-lactámicos como penicilinas, cefalosporinas y carbapenems. Estas enzimas requieren cinc para actuar y se inhiben por quelantes de metales, tales como EDTA y compuestos tiol. Por lo general, las cepas de P. aeruginosa productora de MBL tienen resistencia a diferentes grupos de antibióticos y ésta puede transferirse a distintos tipos de bacterias. P. aeruginosa productora de MBL es responsable deepidemias hospitalarias en centros terciarios, lo cual manifiesta la importancia de las medidas de control adecuadas. Asimismo, fue responsable de infecciones graves, como septicemia y neumonía. Por lo general, la resistencia a carbapenems se atribuye a la falta de permeabilidad por pérdida de porina OprD o a la producción de MBL. En la actualidad no existen parámetros estandarizados para ladetección de organismos productores de MBL. El National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) estableció guías para la identificación de gérmenes productores de beta-lactamasas de amplio espectro; las mismas requieren pruebas de confirmación con cefotaxima y ceftazidima en forma aislada o en combinación con ácido clavulánico.
Existen varios procedimientos fenotípicos para elreconocimiento de bacterias productoras de MBL y todos se basan en la capacidad de quelantes o de compuestos tiol de inhibir la actividad de MBL. Además, se dispone de métodos genéticos basados en reacción en cadena de polimerasa (PCR). En este artículo, los autores evaluaron un método diagnóstico para la detección de P. aeruginosa productora de MBL. Para ello utilizan el procedimiento bioquímico basado enEDTA como alternativa simple de rastreo y también analizan un ensayo diagnóstico molecular para la confirmación de MBL tipo imipenem (IMP). Los resultados se compararon con los de la prueba comercial para la identificación de MBL (Etest). Asimismo, determinaron la prevalencia de estas enzimas entre cepas clínicas de P. aeruginosa con sensibilidad intermedia y resistencia a imipenem.
Materiales ymétodos
Se utilizaron controles positivos y negativos bien definidos y se determinó la concentración inhibitoria mínima frente a piperacilina (PIP), ceftazidima (CAZ), IPM, ciprofloxacina (CIP), gentamicina (GEN) y tobramicina (TOB). Se emplearon como cepas control Escherichia coli ATCC 25922 y P. aeruginosa ATCC 27853. Se creó un método en disco para la detección de la producción de MBL condistintas concentraciones de EDTA, IPM y meropenem (MEM). Las zonas de inhibición se determinaron con la metodología establecida por el NCCLS para discos o en agar Mueller-Hinton. Se aplicó un inóculo de alrededor de 106 unidades formadoras de colonias. Para establecer la cantidad más apropiada de EDTA que pudiera distinguir entre cepas productoras de MBL de aquellas no susceptibles a IPM se probarondiscos con 10 µg de IPM y 10 µg de MEM, solos o en combinación con 744 µg, 930 µg y 1 302 µg de EDTA. Debido a que este último presenta algo de actividad bactericida se incluyó un disco blanco sin antibióticos; los procedimientos se realizaron por duplicado. La presencia de MBL se evaluó en las cepas clínicas de P. aeruginosa no susceptible a IPM con la prueba de rastreo con EDTA y con la pruebacomercial para detección de MBL. Se realizó amplificación por PCR para la identificación simultánea de genes de beta-lactamasa blaIMP y blaVIM. Los productos de PCR se analizaron por electroforesis con gel de agarosa al 1.4%, teñidos con bromuro de etidio y visualizados con luz ultravioleta. La sensibilidad y especificidad de los cebadores se evaluaron con cepas cuyos mecanismos de resistencia se...