Determinacion de biomasa en peso

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DETERMINACION DE BIOMASA EN PESO

La única manera de medir la masa celular es determinar el peso seco del material celular en un volumen fijo de cultivo. Para ello, hay que separar las células del medio, separarlas, pesarlas. Tal determinación requiere mucho tiempo y es relativamente poco sensible. Con un equipamiento ordinario es difícil pesar con exactitud menos de 1mg, y sin embargo estepeso seco puede suponer el equivalente a unos 5000 millones de bacterias. (Stanier, 1992)

El número de organismos unicelulares de una suspensión puede determinarse microscópicamente contando las distintas células que hay en un pequeño volumen medido con exactitud. Tal operación de lleva a cabo habitualmente en unos portaobjetos especiales denominados cámaras de recuento. Estas cámaras vanmarcadas con cuadros de área conocida y admiten una fina capa de líquido de profundidad conocida entre el portaobjetos. Ello permite conocer exactamente el volumen de líquido corresponde a cada cuadrado de la cámara. El cómputo directo se denomina recuento total de células e incluye tanto células viables como las no viables, ya que, al menos en el caso de las bacterias, no se pueden distinguir unas deotras por examen microscópico. (Stanier, 1992)

PESO SECO CELULAR:

Utilícese el método de la capsula de aluminio o el del filtro d membrana en el caso del primero centrifúgese en una proporción adecuada de suspensión de algas: lávese tres veces las células sedimentadas con agua destilada en presencia de 15 mg NaHCO3/l; transvasase el sedimento a crisoles o capsulas de aluminio previamentetarados; déjese secar durante toda la noche a 1050C en un horno de aire caliente y procédase a pesar. Este método es más sensible que el segundo, aunque existe la posibilidad de que se pierdan células durante el proceso de lavado. (Bravo, 1992)

El peso seco (contenido de sólidos) de las células bacterianas que se encuentran en una suspensión se obtiene por el secado de un volumen en un horno a105°C hasta peso constante. Esta técnica es útil para grandes volúmenes de muestra, debido a que diferencias del orden de los miligramos representan el peso de un gran número de bacterias. La desventaja de este método es que componentes volátiles de la célula pueden perderse por el secado y puede existir alguna degradación. También la muestra seca puede recobrar humedad durante el pesado,principalmente si el ambiente tiene una humedad relativa alta.

"El aumento de volumen con la humedad tiene un límite. Este va creciendo hasta que la célula alcanza un porcentaje de humedad que corresponde al punto de saturación de la pared celular, aproximadamente del 30 % para todas las especies en cálculos técnicos. A partir de éste valor el volumen permanece constante, ya que el agua que penetra en elvolumen de las células no produce hinchamiento de la pared celular. Por lo tanto, el valor del 30 % es un valor para utilizarlo prácticamente, si bien cada especie tiene su punto de saturación de la pared celular" (2). No sucede así con el peso, cuyo valor sigue aumentando hasta alcanzar el contenido máximo de agua para la especie correspondiente.

PESO HÚMEDO:

Se obtiene a partir de unamuestra en suspensión que es pesada luego de la separación de las células por filtración o centrifugación. Es una técnica útil para grandes volúmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad de líquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de células bacterianas muy empaquetadaspuede contener un espacio intercelular que aporta entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformación celular.

Para corregir el peso húmedo se determina la cantidad de líquido que queda retenida en el espacio intercelular luego de una centrifugación, para ello se utilizan soluciones de polímeros no iónicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el espacio intercelular pero no...
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