Determinacion de coliformes

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DETERMINACIÓN DE COLIFORMES
OBJETIVO: IDENTIFICAR LOS TIPOS DE COLIFORMES EN UNA MUESTRA DE AGUA.
MATERIALES Y EQUIPOS:
* CALDO GLUCOSADO
* CALDO PEPTOSA
* AGAR CITRATO
* TUBOS DEENSAYO
* BAQUETA
* VASO DE PRECIPITACION
* COCINILLA
PROCEDIMIENTO:
1. AISLAR POR SEPARADO, UNA ASADA DE CADA TUBO CON GAS POSITIVO, EN PLACAS DE AGUA EMBO O AGAR ENDO.
2. INCUBARLAS PLACAS INVERTIDAS POR 24 HORAS A 37ºC, PARA OBTENER COLONIAS AISLADAS.
3. PICAR UNA COLONIA REPRESENTATIVA POR HACER COLORACION GRAM Y LA PRUEBA DE IMVIC.ESTAS PRUEBAS COMPRENDEN LO SIGUIENTE.PRUEBA DE INDOL:
a) INCUBAR EL TUVO CON CALDO TRIPTOSA.
b) INCUBAR POR 24 HORAS A 37ºC.
c) DESPUES DE LAS 24 HORAS ADICIONAR DE 2 A 3 GOTAS DE REACTIVO DE KOVACS POR LAS PAREDES.
d)DEJAR LOS TUBOS EN REPOSO Y OBSERVAR LA FORMACION DE UN ANILLO DE COLOR ROJO PARA EL RESULTADO POSITIVO, UN ANILLO COLOR AMARILLO PARA EL NEGATIVO.
PRUEBA DE ROJO DE METILO:
a) INCUBAR LOS TUBOSOBTENIENDO CONTENIENDO CALDO GLUCOSADO.
b) INCUBAR LOS TUBOS POR 72 HORAS A 37ºC.
c) DESPUES DE LAS 72 HORAS ADICIONAR 5 GOTAS DE SOLUCION ROJO DE METILO Y AGITAR.
d) ANOTAR COMO ROJO DEMETILO POSITIVO, LA APARICION DE UN COLOR ROJO Y COMO NEGATIVO LA APARICION DE UN COLOR AMARILLO.
PRUEBA DE VOGES PROSKAVER:
a) INCUBAR LOS TUBOS DE CALDO GLUCOSADO.
b) INCUBAR A 37ºC POR 72HORAS.
c) SE PUEDE ADICIONAR SOLUCION DE ROJO DE METILO Y ANOTAR COMO POSITIVO VP,LA APARICION DE UNA COLORACION AMARILLENTA Y COMO NEGATIVO LA APARICION DE UNA COLORACION OJA.EN OTRO CASOPIPETEAR POR SEPARADO 1ML DE CALDO DE CULTIVO Y ADICIONAR 0.06 ML DE NAFTOL Y 0.2ML DE SOLUCION DE HIDROXIDO DE POTASIO ,AGITAR LOS TUBOS Y DEJAR EN REPOSO POR 2 A 4 HORAS.ANOTAR COMO POSITIVO EL DESARROLLODE UN COLOR ROSADO A CAMESI.
PRUEBA DEL CITRATO:
a) INCUBAR LOS TUBOS DE CITRATO DE SIMMONS.
b) INCUBAR A 371C POR 24 HORAS.
c) ANOTAR COMO POSITIVO UN CRECIMIENTO VISIBLE,ACOMPAÑADO DE...
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