“DETERMINACION DE GLUCOSA EN AYUNAS”

PRACTICA N° 2
“DETERMINACION DE GLUCOSA EN AYUNAS”


Grupo: B Mesa:

Sub-grupo: Gabinete:

Nombre del docente:



Fecha de la practica: Jueves 8 de septiembre de 2011
Objetivos específicos

Que al finalizar el laboratorio práctico el estudiante sea capaz de:

1-Aplicar un método enzimático para la cuantificación de glucosa en sangre.


2- Investigar la concentración de glucosa en sangre en el estudiante voluntario en estado de ayuno.



3- Valorar la utilidad de la cuantificación de glucosa en ayuno para el diagnostico de Diabetes Mellitus.










Material y equipo a utilizar
2 tubos de centrifuga1 Gradilla
1 termómetro
3 tubos de ensayo
3 pipetas graduadas de 0.1 ml
1pipeta de 5 ml
Baño de Maria a 37° C
Espectrofotómetro

Reactivos
Solución reactivo de color: Buffer fosfato pH= 7.5, 4-aminofenazona, Fenol, Glucosa oxidasa (GOD), Peroxidasa (POD), Mutarrotasa, Estabilizantes.
Estándar de glucosa: (std): 100 mg/dl (5.55mmol/l)

Muestra

Suero o plasma heparinizado o con EDTA





Procedimiento

La práctica se realizará con la sangre donada por voluntarios, quienes deberán presentarse al laboratorio en estado de ayuno no menor de 12 horas y en esas condiciones se les extraerá una muestra de sangre (5ml) de las venas que se encuentran a la altura del codo, ya sea en lacefálica, basílica o lunar, colocándola en un tubo de centrífuga que rotulará M (muestra).
Se obtendrá el suero de la muestra de sangre y después se determinará la concentración de glucosa por el método enzimático.

Técnica para la obtención de Suero.

Se coloca la sangre extraída en un tubo de centrífuga completamente seco.
Deje coagular la sangre a temperatura ambiente, colocando el tubo enposición levemente inclinada por aproximadamente 15 minuto.
Con un palillo de madera de las paredes del tubo el coágulo formado y luego centrifugue por 10 minutos a 2000 RPM.
Extraiga el suero utilizando un gotero y deposítelo en un tubo pequeño que rotulará debidamente.

PROCEDIMIENTO ANALÍTICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE LA GLUCOSA POR EL MÉTODO ENZIMÁTICO COLORÍMETRO DE LA GLUCOSA OXIDASA(“GOD-PAP”)

Fundamento del Método.

La determinación de glucosa se lleva a cabo después de la oxidación enzimática en presencia de Glucosa oxidasa. El indicador colorimétrico es la quinoneimina, la cuál se forma a partir de peróxido de hidrógeno, 4-aminofenazona y fenol bajo la actividad catalítica de la peroxidasa (Reacción de trinder)
Glucosa + O2 + H2O – Glucosa oxidasa ácido glucorónido + H2O22H2O2 + 4- aminofenazona + fenol –peroxidasa Quinineimina + 4 H2O

Procedimiento
Para Bilirrubina total
1) En tres tubos de ensayo pequeños rotulados: blanco, muestra y estándar, prepare de acuerdo al cuadro siguiente.















2) Mezclar bien los tubos e incubar 5 minutos a 37°C y leer la absorbancia del Estándar y la muestra frente a un blanco e reactivo antes de 60minutos en el espectrofotómetro a 500 nm.




Observaciones:









Conclusiones:










Cálculos:

Fórmula para los cálculos

Abs. de muestra x 100 = mg de glucosa/dL
Abs. De Estandar



















Resumen bibliográfico
Glucosa en sangre la concentración de glucosa en sangre es la cantidad de glucosa que contiene la sangre. Laglucosa es procedente de los alimentos que ingerimos, y también se forma y almacena dentro del cuerpo. Es la principal fuente de energía de las células del cuerpo, y se transporta a todas las células a través del torrente sanguíneo.
REGULACIÓN ENERGÉTICA CON INSULINA
La comprensión de la regulación energética implica la hipótesis de dos centros reguladores
hipotalámicos, que denominaremos A y...