DETERMINANCIÓN DE LA ACTIVIDAD DE UREASA

I. INTRODUCCIÓN:

Los enzimas son biocatalizadores muy potentes y eficaces, químicamente son proteínas. Como catalizadores, los enzimas actúan enpequeña cantidad y se recuperan indefinidamente. No llevan a cabo reacciones que sean energéticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios químicos, sino que aceleran suconsecución. De manera general, una reacción química catalizada por una enzima se representa de la siguiente manera:










La ureasa, aislada y cristalizada en 1926 por el bioquímico estadounidenseJ.B. Summer, se puede aislar de vegetales, mohos y bacterias, no encontrándose presente en las células de mamíferos. Esta enzima actúa sobre enlaces carbono- nitrógeno (C-N) diferente de los enlacespeptídicos y cataliza la siguiente reacción: UREA + H2O  CO2 + 2NH3, pudiendo ser inhibida por iones plata, mercurio y otros metales pesados. Se señala que un reductor suave como el sulfito producesu inactivación reversible. Una unidad de ureasa se define como aquella que libera un micromol de amoniaco a partir de urea, por minuto, bajo condiciones de ensayo específicas de ph y temperatura (pH7.2 y 37)

El objeto de la presente experiencia es demostrar la actividad enzimática, determinando para ello la actividad de ureasa.

II. MATERIAL Y MÉTODOS
1-MATERIALES:

-Material Biológico:Enzima Ureasa (E.c.3.5.1.5. Urea amidohidrolasa)
-Material y Equipo de Laboratorio:
Gradillas para tubos.





Tubos de ensayo de 13 x 100 mm (07)


Pipetas de 1 ml (02; una al 1/100), 2 ml,5ml y 10 ml.


Baño María a 37.


Goteros o pipetas descartables de plástico.
Pizeta con agua destilada.
Espectrofotómetro o Fotocolorímetro.


Buffer Tris-HCL O.O5 M, pH 7.2
Solución deurea 0.075 M en buffer Tris – HCL 0.05 M, pH 7.2
Solución de ureasa 0.05%
Solución de HgCl2 1 %
Solución de rojo de metilo 0.04 %


2-MÉTODOS:
A. SISTEMA DE INCUBACIÓN

COMPONENTES (mL) Y... [continua]

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