Determinacion del numero mas probable

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CONTENIDO

1 INTRODUCCIÓN
La presencia y extensión de la contaminación fecal es un factor importante en la determinación de la calidad de un cuerpo de agua. Las heces contienen una variedad de microorganismos, involucrando organismos patógenos, los cuales son un riesgo para la salud publica al estar en contacto con el ser humano. El análisis de muestras de agua para determinar la presencia demiembros del grupo coliforme, que habitan normalmente en el intestino del hombre y otros animales de sangre caliente, da una indicación sensible de dicho tipo de contaminación. Dado que la capacidad de algunos miembros del grupo coliforme para sobrevivir en agua es limitada, sus números pueden emplearse también para estimar el grado de contaminación fecal.

2 DEFINICIONES
Organismos Coliformestotales:
Los Organismos coliformes totales son capaces de crecer aeróbicamente en un rango de temperatura de 35 ± 1°C a 37 ± 1°C en un medio de cultivo liquido lactosado con producción de ácido y gas en un periodo de 48 horas. Están constituidos por un grupo heterogéneo y se aplica a todas aquellas bacterias semejantes a la Escherichia coli en su hábitat, morfología y cultivo.

OrganismosColiformes fecales:
Los Organismos Coliformes fecales son aquellos capaces de crecer aeróbicamente en Caldo EC con producción de gas y turbidez en un periodo de 24 horas a una temperatura de 44 + 0.5°C.

Para tener una estimación de la cantidad de organismos coliformes en el agua, se realiza un recuento por la técnica del número más probable, esta consta de una prueba presuntiva y de unaconfirmativa.

3 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION

3.1 OBJETIVO
Determinar el Número Más Probable de organismos coliformes totales y fecales presentes en una muestra de agua residual.

3.2 ALCANCE O CAMPO DE APLICACIÓN
Este método es aplicable para la determinación de organismos coliformes totales y fecales en todo tipo de agua, exceptuando aguas salinas con altos contenidos de diatomeas o cuandonúmeros grandes de otros organismos puedan interferir con el crecimiento.

4 FUNDAMENTO
El método se basa en la inoculación de alícuotas de la muestra, diluida o sin diluir, en una serie de tubos de un medio de cultivo liquido conteniendo lactosa.
Los tubos se examinan a las 24 y 48 horas de incubación en un rango de temperatura de 35 o 37°C. Cada uno de los tubos que muestran turbidez conproducción de gas se resiembra en un medio confirmativo más selectivo, caldo Verde Bilis Brillante para Coliformes totales incubados de 35 a 37 °C por 48 horas. Y para Coliformes fecales se resiembra en tubos con caldo EC incubándose a una temperatura de 44.5°C por 24 horas.
Mediante tablas estadísticas se lleva acabo él calculo del numero más probable (NMP) de organismos coliformes totales yorganismos coliformes fecales que puedan estar presente en 100 cm3 de muestra, a partir de los números de los tubos que dan resultados confirmativos positivos.

La prueba del NMP se fundamenta en que las bacterias coliformes fermentan la lactosa incubadas a 35°C ± 1 °C durante 24 horas, resultando una producción de ácidos y gas el cual se manifiesta en las campanas de fermentación.

5 EQUIPO, MATERIALY REACTIVOS

5.1 Equipo
Horno de aire caliente para esterilización con calor seco.
Balanza analítica
Incubadora controlada a 35 °C ± 1°C
Baño de agua controlada a 44 °C ± 0.5°C
Autoclave u olla de presión con manómetro.
Pipeteros de aluminio o acero inoxidable
Potenciómetro

5.2 Materiales
Material usual de vidrio
Tubos de vidrio con rosca de 15mm x 150 mm.
Tubos de vidrio conrosca de 13mm x 100 mm.
Tubos de fermentación (Durham).
Asa de inoculación.
Frascos para toma de muestras, de vidrio resistente o cristal refractario de 250 cm3 de boca ancha, con tapón de cristal esmerilado

5.3 Reactivos y Soluciones preparadas.
Los reactivos que a continuación se mencionan, deben ser grado analítico a menos que se indique otra cosa. Cuando se especifique el uso de agua...
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