Determinación de nitrógeno por el método de KJELDAHL







Laboratorio de bioquímica N°3
Determinación de nitrógeno por el método de KJELDAHL











Introducción :
El método de Kjeldahl es un método a través del cual es posible determinar la cantidad de nitrógeno orgánico presente en una muestra. Este se realiza en alimentos y bebidas, tales como carnes, cereales y forrajes para el cálculo de contenido de proteína, tambiénes posible aplicarla a aguas residuales, suelos y otras muestras, en este caso el método se aplica en una muestra láctea proveniente de riles lácteos. Consta de 3 etapas, las que son ; digestión, destilación y titulación, con esta última se está en disposición de los cálculos del tanto por ciento de proteínas en la muestra de leche.

Objetivo General:
Determinación de nitrógeno orgánico totalpor medio del método de Kjeldahl.
Objetivo especifico:
Recuperación de amoniaco mediante el método de Kjeldahl.
Determinación de nitrógeno en las proteínas.








Desarrollo:

ETAPA DE DIGESTION

n -C -NH₂ + mH₂SO₄ CO₂ + (NH₄)₂ SO₄ +SO₂

fórmula que corresponde a este proceso es la siguiente:El (NH₄)₂ se transforma en sulfato de amonio, luego en un medio alcalino se realiza un arrastre de vapor.

Se agita la muestra láctea con una bageta , de manera que la grasa de la leche quede homogeneizada.
A 0,25 mL. de muestra se agregan 5 mL. de ácido sulfúrico concentrado (H₂SO₄), esto eleva el punto de ebullición para favorecer lamineralización de la leche. En el momento en que el ácido sulfúrico entra en contacto con la leche se produce una carbonización parcial de la muestra, tomando un color café oscuro.
Se añaden perlas de ebullición, al momento de la ebullición de la mezcla las perlas saltan, lo que ayuda a disipar la energía, y con esto energía calórica pasa a ser energía cinética ( con el movimiento de las perlas).
Se tarala balanza y se Agrega 0,25 gr. de mezcla catalizadora, cuidando que no quede en las paredes del tubo de ensayo, esto aumentara la velocidad de reacción de mineralización.
Se dejan las muestras bajo campana , la combustión se realiza a 120°c, se aplica calor en forma gradual durante 4 horas, se produce una reacción exotérmica, finalmente la muestra queda incolora.



Salen vapores de ácidosulfhídrico (H₂S), estos son peligrosos ya que pueden transformarse en ácido sulfúrico al contacto con el agua del ambiente.
Luego de 4 horas, y una vez fría la muestra se afora a aproximadamente 100 mL. de agua destilada, revolviendo de forma lenta , de manera que el agua pase por las paredes del tubo a la vez que se agita, de este modo se evita que salpique por la reacción enérgica entre el ácidosulfúrico y el agua.
ETAPA DE DESTILACION


La neutralización y destilación tiene la siguiente forma:

(NH₂)SO₄ +2NaOH 2NH₃ + NaSO₄ +2H₂O

NH₃ +H₃BO₃ (ácido bórico) NH₄ + H₂BO₃⁻ (ión borato)

El aparato de micro Kjeldahl que se usa se encarga de la adición de hidróxido de sodio al 40% para laformación del amonio y la destilación del mismo.

Se abre la llave de del agua para tener H₂O circulando por el refrigerante todo el tiempo.
Se añade la mezcla a la cámara de ebullición, previo a esto es necesario sacar las perlas de ebullición con un embudo y se prepara una alícuota de 20 mL. de muestra en el matraz Erlenmeyer con 100 mL. de agua.
El vapor no está en contacto con la muestra.Se coloca un Frasco Erlenmeyer con 10 mL. de ácido bórico y aproximadamente 5 gotas de indicador Verde Bromocresol al 0,1% p/v bajo la salida de destilación.
en la copa del aparato se añaden 10 mL. de muestra y 20 mL.de hidróxido de sodio(NaOH) al 40%.
La mezcla baja y hierve, los vapores se enfrían y se colecta el amonio.
Se condensa el amoniaco( ya que es volátil), sumergiéndolo en 10...