Deterninacion de azucares reductores

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DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES

Fundamento

La determinación de azucares reductores se realiza utilizando el método calorimétrico de Acido Dinitrosalicílico (DNS). Este método se seleccionapor ser rápido y reproducible.

La concentración se obtiene a partir de la recta obtenida al realizar la curva de calibración, que correlaciona la Absorbancia medida a 540 nm con la concentraciónde Glucosa. Los patrones son preparados con D-Glucosa de Merck.

Procedimiento de preparación del reactivo DNS
▪ Pesar 4 g de NaOH y Disolverlos de 250 mL de agua destilada y 75 g de Tartrato deSodio y potasio.
▪ Agregara 2,5 g de DNS, bajo calentamiento a baño de Maria.
▪ Aforara 500 mL con agua destilada.
▪ Almacenar a temperatura ambiente y proteger de la Luz

Procedimiento para ladeterminación de azucares reductores

▪ Agregar 1 mL de reactivo a 1 mL de muestra usando tubos tapa rosca.
▪ Poner en calentamiento durante 5 minutos en baño de agua
▪ Detener la reacción en un bañocon Hielo
▪ Agregar 10 mL de agua destilada y dejar en reposo 15 min.
▪ Medir la Absorbancia óptica a 540 nm contra el blanco obtenido en el procedimiento anterior (para este blanco se agrega aguadestilada en lugar de muestra).

Procedimiento de Elaboración de la recta de Absorbancia Vs concentración de azucares reductores.

Preparación de patrones

Tomar solución de 1 g/l de GlucosaAforar 10 mL, llevar a frasco de tapa rosca
Tomar muestra de 8 mL y aforar a 10 mL con agua destilada
Tomar Volumen de 6 mL y aforar a 10 mL con agua destilada
Tomar Volumen de 4 mL y aforar a 10 mLcon agua destilada
Tomar Volumen de 2 mL y aforar a 10 mL con agua destilada

Se desarrolla el procedimiento de azucares reductores, tres veces para asegurar la reproductividad de los datos.Determinación de proteína Celular. (Bradford, 1976)

Fundamento: Este método es rápido, reproducible y sensible para cuantificar Proteínas en un intervalo de 10-100 mg/L, sin presentar interferencias...
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