Dialisis

INTRODUCCIÓN.
La diálisis es una técnica la cual se utiliza para separar moléculas en una solución mediante el uso de membranas semipermeables que permiten el paso de pequeñas moléculas en solución, impidiendo el paso de las de mayor tamaño, se lleva a cabo mediante un proceso el cual la solución proteica es colocada un tubo o bolsa de diálisis que se sujeta por un extremo, los solutos de bajopeso molecular se difunden hacia fuera del tubo, esta técnica enfocado a la practica realizada se puede concentrar o diluir la enzima amilasa salival debido a que tiene naturaleza proteica, el equilibrio se puede usar para determinar la estequiometria de la unión proteica-ligando
Por otro lado la electroforesis es un método en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada, con la finalidadde separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica cuando una mezcla con moléculas es puesta en un campo eléctrico dichas moléculas sienten atracción hacia el polo opuesto a su carga eléctrica de esta manera: CATODO- ANION , ANODO-CATION.
OBJETIVOS:
Observar el método de diálisis mediante una muestra de saliva para ver el comportamiento de la enzima amilasa salival en una muestradializada y no dializada.
Realizar un método cualitativo colorimétrico mediante un colorante (lugol) aplicado a una muestra de saliva dializada y no dializada para observar el comportamiento de la enzima amilasa con confectores y sin confectores (Cl-) en la degradación del almidón.
Realizar un método de separación electroforesis) por medio de una mezcla de aminoácidos para analizar elcomportamiento de los componentes de la mezcla mediante sus cargas netas y revelarlos con ninhidrina para su identificación.

ANALISIS DE RESULTADOS.
La electroforesis se realizo como un método de separación e identificación, para Ac. Glutamico, argentina, prolina y lisina, la separación de dichos aminoácidos se debe a la carga neta que estas moléculas poseen, debido a que la electroforesis se basa en lamigración de estas moléculas en un campo eléctrico, hacia el polo opuesto a su carga, el cual se define con el uso de un buffer a pH conocido distinto al de la muestra, en este caso la carga neta es pH= 8.6.
Se llevo a cabo la electroforesis y al retirar la tira de papel de la cámara de electroforesis se rocío con el revelador ninhidrina (también llamada hidrato de tricetohidrindeno que es unoxidante energético que por una desanimación oxidativa de los aminoácidos conduce a la formación del aldehído correspondiente, con liberación de amoniaco y gas carbónico y formación de la Ninhidrina reducida o hidrindrantina que da el color-).
El Ac. Glutamico tiene tres grupos disociables cuyos Pka son: pK1=2,1; pK2=3,9 y pK3=9,8:

La forma I (totalmente protonada) tiene una carga netapositiva y predomina a pH bajos. La forma II tiene carga neutra (una positiva y una negativa) predomina a pH= 3.7, la forma III tiene una carga negativa y predomina a pH = 7, la forma IV tiene dos cargas negativas y predomina a pH elevados. El punto isoeléctrico del ácido glutámico será aproximadamente 3,0 (la semisuma de pK1 y pK2, los pK que flanquean a la forma zwitterión). Tomando en cuenta loanterior podemos decir que el Ac glutamico a pH= 9.8 tiene una carga neta negativa por lo que sus moléculas migran hacia el polo positivo u ánodo representado en los resultados de color rosa.
En el caso de la arginina existen dos grupos básicos y uno acido, su disociación se representa de la siguiente manera donde pK1=2,2; pK2=9,2 y pK3=12,5:

La forma I (totalmente protonada) tiene dos cargaspositivas. La forma II tiene una carga neta positiva, la forma III es neutra (una positiva y una negativa) y la forma IV tiene una carga negativa. El punto isoeléctrico de la arginina será aproximadamente 10,85.La proporción de moléculas en la forma I (2 cargas positivas) es tan pequeña que puede considerarse como despreciable a la hora de calcular el pI. Por lo que este aminoácido migrara hacia el...
tracking img