Diferenciacion bioquimica

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Introducción

Pruebas bioquímicas:
Se tratan de un conjunto de reacciones basadas en el metabolismo de los microorganismos. Entre otros aspectos, se analiza la acción de la bacteria sobre los hidratos de carbono (qué fuente de carbono utiliza, en qué condiciones, cómo la utiliza, qué productos se obtienen), la liberación de exoenzimas, metabolitos y toxinas al medio de cultivo, lamotilidad, etc. A partir del conocimiento del metabolismo, las pruebas bioquímicas nos permiten determinar el género y la especie de la bacteria en estudio.
Esta identificación debe hacerse a partir de un cultivo puro y fresco (18-24 horas). Hay que tener en cuenta, además, que las características metabólicas de los microorganismos pueden variar en función de distintos factores de manera que pararealizar una caracterización confiable es necesario realizar las pruebas en condiciones estandarizadas (en cuanto al inóculo, los reactivos, las condiciones de incubación y el tiempo de lectura) y utilizar más de una prueba en cada caso.

Hidrólisis del almidón:
Los polisacáridos, como el almidón son demasiado largos para ser transportados al interior de la célula. Los microorganismos excretanamilasas que hidrolizan esos polímeros hasta oligo o monosacáridos que pueden usarse como sustratos para crecer.

Catalasa:
La catalasa es una enzima que protege a las células frente al peróxido de hidrógeno producido en el metabolismo del oxígeno. Cataliza la formación de agua y peróxido de hidrógeno.

Citrato:
Es uno de los test IMViC para diferenciar enterobacterias. El crecimientoconsume el ácido y como consecuencia se produce un incremento del pH en el medio.

Agar TSI:
Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico. 
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. Lalactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balanceosmótico.

Agar Levine:
Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias, que inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y permite la diferenciación de bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa, dando lugar a colonias incoloras, las no fermentadoras, y colonias de color azulado-negro con cierto brillo metálico, las fermentadoras.Objetivos

• Realizar algunas pruebas bioquímicas en medios de cultivo con sustratos específicos que permitirán demostrar actividades metabólicas de bacterias.

• Comprender la importancia de las pruebas bioquímicas para la caracterización de estos microorganismos.

• Determinar la actividad de amilasas en el caldo almidón por el crecimiento y por la ausencia de coloración al agregarlugol.

Preparación

• Técnica de inoculación en caldo almidón y manitol:

1. Inocular la muestra problema y dejar un tubo sin inocular.
2. incubar los tubos a 35ºC durante 24-48 h.

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Tubo con almidón Tubo con manitol• Técnica de inoculación en tubos con agar:

1. Los tubos con agar TSI y Citrato se inocularon con la muestra problema por estría simple en la superficie y por picadura hasta el fondo del tubo. Se deja un tubo de cada uno sin inocular.
2. Incubar los tubos a 35ºC durante 24-48 h.

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Tubo con TSI...
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