Diluciones para el recuento de viables en placa

Trabajo Práctico Nº 6

Diluciones para el recuento de viables en placa

Unidad 6: Crecimiento microbiano

Año calendario: 2010

Objetivos: Que los alumnos manejen correctamente el proceso dediluciones seriadas para poder determinar cuantitativamente el número de células viables de un cultivo.

Fundamento Teórico: Existe una variedad de métodos para numerar cuantitativamente a losmicroorganismos presentes en una muestra a analizar. Entre ellos se incluye el recuento directo mediante microscopio, uso de contadores electrónicos de células (Contador Coulter), métodos químicos para laestimación de la masa celular total o constituyentes celulares, mediciones turbidimétricas y el método de diluciones seriadas con recuento de viables en placa. Este último es una medida indirecta dela densidad celular y solo da información de bacterias vivas.
Considerando que una colonia bacteriana se desarrolla a partir de una única célula, la técnica de recuento de viables en placapermite determinar el número de bacterias o UFC (unidades formadoras de colonia) presentes originalmente en una muestra a analizar.
Para asegurar un recuento exitoso, el numero de colonias no debeser mayor a 250, ya que las colonias están demasiado cercanas una de otra como para distinguirlas claramente, ni menor a 25 colonias por razones estadísticas. Con el objeto de garantizar una cantidadaceptable de colonias se hacen diluciones seriadas de la muestra, y una alícuota de las diluciones se siembra en placas con medio de cultivo sólido. La posterior incubación de las mismas permitirá eldesarrollo de colonias que puedan contarse.
La técnica que utilizaremos implica esparcir el inóculo sobre la superficie del agar con ayuda de la espátula de Drigalsky.

Desarrollo experimental:1. Rotular los tubos de ensayos estériles desde 10-1 hasta 10-6.
2. Rotular las placas con agar nutritivo con el valor de la última dilución que se siembra (considerar el factor de dilución...