DNA Polimerasa

La polimerasa Taq es un tipo de DNA polimerasa termoestable, tiene el nombre de esta forma debido a que es producida por la bacteria Thermus aquaticus y a partir de la cual fue aislada en el año 1968por Thomas D. Brock. T. aquaticus es una bacteria que vive en manantiales calientes y fuentes hidrotermales, y la polimerasa Taq que de ella se extrae ha sido caracterizada como una extremoenzimacapaz de soportar las condiciones de alta temperatura requeridas durante el proceso de PCR sin desnaturalizarse. Por esta razón ha reemplazado a la ADN polimerasa proveniente de E. coli que era la queoriginalmente se utilizaba en esta técnica, pero que requería ser reemplazada luego de cada ciclo de calentamiento aumentando las probabilidades de contaminación y prolongando los tiempos. Latemperatura óptima de funcionamiento de la Taq es de 75–80°C, con una semivida mayor a las dos horas a 92,5°C, 40 minutos a 95ºC y 9 minutos a 97,5ºC. Esta enzima puede replicar una cadena de ADN de 1000 paresde bases en menos de 10 segundos funcionando a 72ºC de temperatura.
Uno de los inconvenientes de la Taq es su relativamente baja fidelidad. Carece de actividad correctora de errores y posee una tasade introducción de errores de aproximadamente 1 cada 9.000 nucleótidos. Sin embargo los dos dominios restantes pueden actuar en coordinación por medio del movimiento acoplado de dominios. Se hanaislado algunas otras polimerasas de ADN de otras bacterias termofílicas y arqueas, tales como la polimerasa Pfu (aislada de Pyrococcus furiosus) que sí poseen actividad correctora de errores; estaspolimerasas se utilizan solas o combinadas con la Taq cuando se requiere una amplificación de alta fidelidad.
La polimerasa Taq produce ADNs que poseen una adenina terminal no apareada colgando de suextremo (tres prima). Esto puede resultar útil en técnicas de clonación TA, donde un vector de clonación (tal como por ejemplo un plásmido) que posee una timina (tres prima) sobresaliente puede ser...