Dot blot

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  • Publicado : 31 de agosto de 2012
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Detección de IgG humana anti Virus de la influenza y Rotavirus mediante el inmunoensayo dot blot
Introducción
Una mancha de puntos (o dot blot) es una técnica en biología molecular para detectarbiomoléculas. Se representa una simplificación de la transferencia Northern, Southern blot, o métodos de western blot. En un dot blot las biomoléculas para ser detectados no se separan primero porcromatografía. En su lugar, una mezcla que contiene la molécula a ser detectada se aplica directamente sobre una membrana como un punto. Esto es seguido por la detección por cualquiera de las sondas denucleótidos (para una transferencia de Northern y Southern blot) o anticuerpos (para un western blot).
La técnica ofrece un ahorro significativo en el tiempo, como la cromatografía o electroforesis engel, y los complejos procedimientos Blot para el gel no se requieren.
En esta práctica se llevara a cabo dicho ensayo para detectar la presencia de IgG humana anti virus de la influenza y rotavirusen suero de una muestra obtenida de pacientes.
Metodología
Para la recopilación de muestras, se llevo a cabo un muestreo dirigido, ya que se obtuvieron muestras de sangre de alumnos del grupo 441 dela Facultad de Ciencias Biológicas. No se conto con el historial médico de los alumnos y de igual manera no se entrevisto a los pacientes para determinar si ya habían entrado en contacto antes conalgunos de estos virus.
Se extrajo 5 ml de sangre de cada paciente, utilizando jeringas de 5 ml como capacidad máxima con agujas de 22G. Después de la recolección de muestras, se procesaron paraobtener el suero. Se utilizaron tubos con un gel para separar el suero de la sangre. Una vez que se conto con el suero, procedimos a llevar a cabo el inmunoensayo conocido como dot blot.
Para realizar eldot blot, primero se agrego al soporte de nitrocelulosa 5 μl de proteína recombinante, después se dejo secar a una temperatura de 25 °C. Una vez seco el soporte, se pocedio a bloquear con leche...
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