Eextraccion de pigmentos

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TRABAJO PRACTICO DE BIOLOGÍA

EXTRACCIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES

Introducción
Además de la clorofila, los vegetales tienen otros pigmentos que "colaboran" en la absorción de la luz solar y en el proceso de la fotosíntesis. Estos pigmentos, fundamentalmente carotenos y xantofilas, de color naranja y amarillo, están tapados por la clorofila.
La técnica de cromatografía es muy sencilla ysirve para extraer pigmentos de las hojas de una planta verdes. En la cromatografía se separan las moléculas, basados en propiedades físicas y químicas de las sustancias a separar, por lo que existen diversos tipos de cromatografía. Pero todas tienen una fase móvil y una fase fija que son las que con sus propiedades hacen que las moléculas se separen en función de sus características en una u otrafase.

MATERIALES
• Hojas verdes, mortero, alcohol (etanol), tiza, papel de filtro, gotero, frascos transparentes, benceno y éter de petróleo.

a) Extracción de pigmentos
1. cortar las hojas de espinaca en pedacitos y machacarla en el mortero mientras se agrega alcohol.
2. se filtra el machacado obtenido y se obtiene una solución alcohólica de pigmentos.
3. se puede colocar esta solucióna baño Maria durante unos minutos para concentrarla (se obtiene un extracto)
b) Separación en tiza
1. Colocar en una placa de petri o en un vaso pequeño 1/2 centímetro de altura del extracto obtenido.
2. sumergir en el extracto la base de la tiza y dejarlo 3 – 5 min.
3. pasado el lapso, retirar la tiza y colocarla en un plato o vaso que contenga casi 1/2 cm de altura de etanol.
4. dejar latiza en el alcohol durante 5 minutos y observar qué sucede.
5. registrar los resultados.

QUÉ ESPERAR

En la tiza los carotenos se separan como una banda amarilla cerca del frente de la cromatografía mientras que la xantofila aparece como una banda verde amarillenta debajo del caroteno. La clorofila debe estar debajo de la xantofila.

c) Separación en papel de filtro
Para realizar estatécnica necesitaremos papel secante, éter de petróleo, benceno y acetona.
NOTA: TRABAJAR CON CUIDADO YA QUE SON MATERIALES TÓXICOS E INFLAMABLES, SE RECOMIENDA TRABAJAR CON BARBIJO Y ALEJADO DE FUENTES DE IGNICIÓN (MECHEROS, LLAVES DE LUZ, ENCENDEDORES, ETC.)

1. Cortar una tira de papel de filtro de 10 cm de largo.
2. Colocar con el gotero una gota de extracto en un extremo de papel (a uncentímetro del extremo). Dejar secar y colocar otra gota. Repetir esto hasta haber colocado entre 8 a 10 gotas de extracto.
3. sumergir la tira de papel en un recipiente que contenga éter de petróleo ( realizar una mezcla de 85 ml de éter de petróleo, 10 ml de acetona y 5 ml de benceno).
4. Atención: la gota de extracto no debe estar sumergida ene le solvente.
5. esperar una hora y observar losresultados.
6. registrar lo observado en el cuaderno

d) Separación de pigmentos por solubilidad diferencial
1. Colocar 2 a 3 cm3 de clorofila en alcohol concentrado.
2. agregar 1 cm3 de benceno. El benceno es soluble en alcohol concentrado; la mezcla es homogénea.
3. se agregan 2 a 3 cm3 de agua; el benceno no es soluble en alcohol diluido; se separan.
4. anotar los resultados.
QUÉ ESPERAR
Seseparan en dos fases. Los pigmentos verdes se disuelven bien en benceno y quedan en la fase superior. El etanol, más denso, contiene los pigmentos amarillos (insolubles en agua), en la fase inferior.

Responder
a) ¿de qué color es el extracto de pigmentos?
b) ¿qué pigmento se podría afirmar que contiene la espinaca?
c) ¿qué conclusión es posible sacar a partir de la cromatografía realizada(tiza y papel)

Pigmento, en biología, moléculas químicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez. El color de un pigmento depende de la absorción selectiva de ciertas longitudes de onda de la luz y de la reflexión de otras. Por ejemplo, la clorofila, el pigmento de las plantas, absorbe luz en la parte violeta y de la zona naranja a la zona roja del espectro...
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