Efecto de concentracion

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Efecto de la concentración del sustrato.

Si en una reacción enzimática se mantiene constante la concentración de la enzima y todos los demás factores que pueden modificar la actividad, se observaexperimentalmente que al aumentar la concentración del sustrato, aumenta progresivamente la velocidad de reacción hasta llegar a un máximo (velocidad máxima.) después del cual ya no afecta lavelocidad aunque se trabaje a concentraciones mas altas de sustrato. En algunas enzimas se observa incluso una disminución en la actividad si se aumenta demasiado la concentración de sustrato.
Experimento3.

Objetivo:
Determinar el efecto que tiene la concentración de sustrato sobre la velocidad de la reacción. Además, comprobar que la reacción enzimática a realizar concuerda con los postulados deMichaelis. Para ello, el estudiante deberá comprender y determinar valores de Km.

Prepare una serie de tubos de ensayo como se indica en la siguiente tabla:

| Tubo |
Reactivos: | 1 | 2 | 3| 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
Sustrato (almidón 8 mg/ml) | 0.5 | 1.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 5.0 | 7.0 | 7.5 |
Sol. Reguladora de fosfatos 0.01m pH=7 ml | 7.0 | 6.5 | 5.5 | 4.5 | 3.5 | 2.5 | 0.0 | 0.5 |Sol de enzima (amilasa) ml. | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.0 |
Mezcle bien los tubos e incube a 40ºC por 15 minutos. |

Transcurrido este tiempo añada a todos los tubos, con objeto dedetener la reacción enzimática, 1ml del reactivo del acido 3,5 dinitrosalicilico; caliente por 10 minutos en baño maría a ebullición para desarrollar color. Enfrié y lea cada tubo en elespectrofotómetro a 540nm empleando el tubo no. 8 como blanco.

Foto 1. Muestra la incubación de los tubos, con sus respectivos reactivos. Durante 15 minutos.

Foto 2. Una vez que se le agrego el acido 3,5dinitrosalicilico, para desarrollar el color; se calentaron los tubos durante 10minutos.

Foto 3. Tubos enfriando después de haber estado en ebullición por 10 minutos. Listos para tomar lectura....
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