El acido urico

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Ácido úrico
Uricasa -POD. Enzimático colorimétrico
BSDTT01 Ed.2004 SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
URIC ACID
Determinación cuantitativa de ácido úrico
IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DEL MÉTODO
El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoína y peróxido de hidrógeno(2H2O2) que en presencia de peroxidasa (POD), 4-aminofenazona (4-AF) y 2-4 Diclorofenol Sulfonato (DCPS) forma un compuesto rosáceo:
Ácido úrico + 2H2O + O2 Alantoína + CO⎯⎯⎯⎯→⎯Uricasa2 + 2H2O2
2H2O2 + 4-AF + DCPSQuinonaimina + 4H⎯⎯⎯→⎯POD2O
La intensidad de quinonaimina roja formada es proporcional a la concentración de ácido úrico presente en la muestra ensayada1,2.
SIGNIFICADO CLÍNICO
Elácido úrico y sus sales son el producto final del metabolismo de las purinas. En una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico.
Niveles altos de ácido úrico son indicativos de patología renal y generalmente se asocia con la gota1,5,6.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS
R 1Tampón
Fosfatos pH 7,4
2-4 Diclorofenol Sulfonato (DCPS)
50 mmol/L
4 mmol/L
R 2
Enzimas
Uricasa
Peroxidasa (POD)
Ascorbato oxidasa
4 - Aminofenazona (4-AF)
60 U/L
660 U/L
200 U/L
1 mmol/L
URIC ACID CAL
Patrón primario acuoso de Ácido úrico 6 mg/dL
PREPARACIÓN
Reactivo de trabajo (RT): Disolver () el contenido de un vial de R 2 Enzimas en un frasco de R 1 Tampón. Tapar y mezclarsuavemente hasta disolver su contenido. Estabilidad: 1 mes en nevera (2-8ºC) o 10 días a temperatura ambiente. →
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
URICACID CAL
Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancia (A) del Blanco a 520 nm 0,16. ≥
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 520 nm.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
-Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
- Suero o plasma1: Estabilidad 3-5 días a 2-8ºC y 6 meses a –20ºC.
- Orina (24 h)1: Estabilidad 3 días a temperatura ambiente a pH > 8. Diluir la muestra al 1/50 en agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado obtenido por 50 (factor de dilución); Si la muestra es turbia, calentarla a 60ºC 10 min para disolver los precipitados de urato y ácido úrico. Norefrigerar.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . .520 nm (490-550)
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta:
Blanco
Patrón
Muestra
RT (mL)1,0
1,0
1,0
Patrón (Nota1-2) (μL)
--
25
--
Muestra (μL)
--
--
25
4. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC ó 10 min. 15-25ºC.
5. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.
CÁLCULOS
Suero o plasma Patrón)A(Muestra)A(x 6 (Conc. Patrón) = mg/dL de ácido úrico en la muestra
Orina 24 h Patrón)A(Muestra)A(x 6 xvol. (dL) orina/24h = mg/24 h de ácido úrico
Factor de conversión: mg/dL x 59,5= μmol/L.
CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador.
Cada laboratorio debe disponer...
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