Electroforesis en gel de poliacrilamida

ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA

La técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida permite separar moléculas cargadas y explota diferencias en movilidad cuando se les somete a laacción de un campo eléctrico. La electroforesis se lleva a cabo sobre un soporte inerte, generalmente sobre geles de poliacrilamida (PAGE). Los geles de poliacrilamida actúan a modo de tamiz molecularretardando el movimiento de macromoléculas grandes mientras que permiten a moléculas más pequeñas moverse libremente, potenciando de esta forma la separación. 1
Una ventaja importante de los geles depoliacrilamida es que son químicamente inertes, transparentes y estables en un amplio rango de pH, temperatura y fuerza iónica.
Los geles de poliacrilamida poseen propiedades tales como transparencia,elasticidad, porosidad controlable y compatibilidad con una gran variedad de compuestos químicos que los hace un excelente medio de soporte para separaciones electroforéticas. 2

GEL DE STACKING: Sufunción es servir de soporte para cargar las muestras y concentrar a las proteínas en un solo punto, para que éstas ingresen en el gel separador uniformemente

GEL DE CORRIDO: Gel en donde lasmoléculas, péptidos y macromoléculas migran de acuerdo a su peso molecular.



GEL DE CORRIDO GEL STACKING
Agua biodestilada 1,6 mL 930µl
Acrilamida/bisacrilam. 2 mL 230µl
TRIS 1,5M pH 8.8 1,3 mL375µl
SDS 10% 50 µl 15µl
Persulfato de amonio 25 µl 30µl
TEMED 10 µl 7,5µl

• Acrilamida: La concentración de acrilamida (% T) representa el porcentaje en peso del monómero total empleado(acrilamida + entrecruzador en gramos por 100 mL) y determina la longitud promedio de la cadena del polímero.3

• Bis-acrilamida: La bis-acrilamida puede actuar como terminador de la cadena en el procesode polimerización y concentraciones altas pueden disminuir el tamaño de poro máximo de gel. 3

• TRIS: Se utiliza ampliamente para preparar disoluciones tampón por el hecho de ser una sustancia...