Electroforesis

Electroforesis capilar

LUIS ENRIQUE MENDOZA

POSTGRADO EN INGENIERÍA BIOMÉDICA
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
MÉRIDA VENEZUELA
NOVIEMBRE 2006

Electroforesis capilar
AGENDA
RESUMEN
TIPOS DE ELECTROFORESIS
EQUIPO DE ELECTROFORESIS CAPILAR EN ZONA
SEPARACIÓN DE MUESTRAS
FENOMENOS DE DISPERSIÓN
ELECTROFEROGRAMA
VENTAJAS-DESVENTAJAS

Electroforesis capilar
RESUMEN

El terminoelectroforesis se emplea para describir la
migración de partículas cargadas bajo la acción de un
campo eléctrico. La electroforesis constituye una
técnica
de
separación
basada
en
diferentes
velocidades (movilidad) de un conjunto de solutos
(sustancia),
sometidos a la acción del campo
eléctrico.

Electroforesis capilar
TIPOS DE ELECTROFORESIS

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Cromatografíaelectrocinética micelar (MEKC).
Isotacoforesis.
Isoelectroenfoque.
Electroforesis capilar en gel (CGE).
Electroforesis capilar en zona (CZE).

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COMPONENTES BÁSICOS EC.

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CROMATOGRAFÍA ELECTROCINÉTICA MICELAR
(MEKC).
la separación es basada en la afinidad de los analitos entre
micelas – tensioactivo(anionicos,cationicos) - electrolito.

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ISOTACOFORESIS.
Electroforesis igual velocidad., la sustancia es ordenada según su
movilidad. Separa solo una sustancia

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ISOELECTROENFOQUE.
La separación es basada en el punto
Isoelectrico de cada analito.
Especies anfóteras (glicina).

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Electroforesis capilarELECTROFORESIS CAPILAR EN GEL
La separación es basada en el tamaño de las moléculas.
Polímeros (monómeros-molécula química sencilla).

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ELECTROFORESIS CAPILAR EN ZONA
Separación en función carga/masa.
Separación de iones + y -.

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POR QUE UTILIZAR ?

Una técnica de separación de sustancias basado en lascaracterísticas de sus velocidades (movilidad) de un conjunto de
solutos (sustancia), sometidos a la acción del campo eléctrico.
Requiere una cantidad de muestra relativamente pequeña.
También por su gran versatilidad y simplicidad de operación.

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COMPONENTES DEL DISPOSITIVO:

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CAPILAR
Capilar de sílice.
Diámetrointerno de 25-100 µm.
Cobertura de polimida.
Permeabilidad a la luz ultravioleta y visible.
Químicamente y eléctricamente estable.
Longitud 50-100 cm.

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FUENTE DE PODER
La migración empieza una vez se aplica el voltaje.
Corriente 10-200 µA.
Tensión 20-40Kv constantes, con el fin de obtener
una alta reproducibilidad en los tiempos de
migración.http://www.relaq.mx/

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ELECTRODOS Y VIALES

Electrodos de platino, teflón o carbón.
Viales, llamados recipientes electrodicos.
Material cristal.

Electrodo platino.

lavallab.kcentric.net/images/platinum

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SISTEMA DE DETECCIÓN
Se utiliza el detector UV-vis.
Detección en columna.
Debe eliminarse polimida del capilar.
Longitudde la onda aprox 240nm.

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ELECTROLITOS
Citrato 3.06pKa (movilidad), Fármaco, analgésico.
Citrato 5.40pKa.
Fosfato 2.12pKa, PH 2.5.
Borato 4.75pKa, PH 9.3.
Acetato 4.75pKa. PH 5.5-6.5.
El PH del electrolito es clave en la separación, ya
que determina el grado de movilidad de los diferentes
analitos.

Electroforesis capilar en zonaMUESTRA

Preparación de 0.1-10nL.
Muestras: vino, sustancia química, tejido.
Los tintes deben tener un espectro de excitación y
emisión en relación con la longitud de onda del
infrarrojo.
Tintes fluorescentes: plata, cromo, bromuro de etidio.

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TIEMPO DE ANÁLISIS
Aplicación de la muestra aprox 10-30 segundos.
Tiempo de total aprox 20-30 minutos.
Tiempo...