Elisa

Universidad Autónoma de Yucatán

Facultad de Química

Inmunología II

Reporte 6: ELISA

Prof.: Dr. Guillermo Valencia Pacheco
Q.F.B. Víctor Parra

Alumna: Br. Neftaly Acenet Ríos Rodríguez

17 de Noviembre del 2011

ÍNDICE

ANTECEDENES……………………………………………………………………………3

OBJETIVO………………………………………………………………………………….4

METODOLOGÍA…………………………………………………………………………..4RESULTADOS Y DISCUSIONES………………………………………………………..5

CONCLUSIONES………………………………………………………………………....6

REFERENCIAS…………………………………………………………………………...7

INTRODUCCIÓN.
La técnica de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), también es conocida como técnica de enzimoinmunoensayo. Esta técnica se basa en la identificación de los complejos Ag-Ac, mediante el empleo de enzimas bien unidas al antígeno, obien unidas al anticuerpo. El ensayo de ELISA puede ser directo o no competitivo, constando de los siguientes pasos:
a) Se tapiza la placa con el anticuerpo específico frente al antígeno a determinar.
b) Se añade la muestra con el antígeno.
c) Se adiciona el anticuerpo secundario marcado con la enzima que en presencia de su sustrato da un producto coloreado soluble, este producto escuantificado mediante el lector de ELISA, e indirecto o competitivo, se diferencia del caso anterior en que se añaden los anticuerpos, previamente incubados con la muestra, los anticuerpos que no se han unido a los antígenos de la muestra lo harán a los antígenos de los pocillos. Como enzimas se suelen utilizar la peroxidasa, la galactosidasa o la glucosa oxidasa.

Esta técnica se utilizapara la medida de hormonas, antígenos de la hepatitis y otras muchas sustancias que se encuentran a muy bajas concentraciones.

Una variante de esta técnica de gran utilidad se conoce como ensayo en fase sólida y está orientada a la determinación de anticuerpos frente a un determinado antígeno. Para ello el antígeno se encuentra fijo a un soporte. Al añadir la muestra con el posible anticuerpo seunirá y podrá ser detectado añadiendo anti-inmunoglobulinas marcadas con el enzima.

Otra variante de las aplicaciones inmunoenzimáticas es cuando el antígeno se encuentra fijo en células o tejidos. En el cual se emplean dos anticuerpos. El primero, con actividad frente a los antígenos a estudiar, y el segundo, que va dirigido frente al primero y que actúa de puente con el complejoportador de la enzima. Cuando la enzima es la peroxidasa, este complejo suele ser una peroxidasa-antiperoxidasa (PAP).
El ensayo ELISA tipo sándwich es un ensayo de captura de antígeno y detección mediante inmunocomplejos. Se trata de un ensayo muy empleado en el que se recubre el pocillo con un primer anticuerpo anti-antígeno. Después de lavar el exceso de anticuerpo se aplica la muestra problema enla que se encuentra el antígeno, que será retenido en el pocillo al ser reconocido por el primer anticuerpo. Después de un segundo lavado que elimina el material no retenido se aplica una solución con un segundo anticuerpo anti-antígeno marcado. Así pues cada molécula de antígeno estará unida a un anticuerpo en la base que lo retiene y un segundo anticuerpo. Este ensayo tiene una granespecificidad y sensibilidad debido a la amplificación de señal que permite el segundo anticuerpo.

Como toda prueba, esta también presenta limitaciones, dando como resultado falsos positivos y falsos negativos. Estos resultados pueden observarse, por ejemplo cuando:
1) Una persona que ha estado enferma y que se ha recuperado, puede seguir produciendo anticuerpos.
2) Cuando se produce una bajacantidad de anticuerpos.
3) Cuando se da una inespecificidad entre antígeno-anticuerpo.

OBJETIVO.

Comprender los fundamentos y desarrollar una prueba de ELISA para la determinación de IL-6, así como el análisis e interpretación de los resultados.

METODOLOGÍA.

Preparación previa de placa de reacción (previamente realizado).
Para esto se trabajaron los reactivos a la temperatura...