ELISA

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CERON CORTES ZYANYA JASHER

E.L.I.S.A
Enzyme Linked
ImmunoSorbent Assay

Antecedentes
 El

nombre enzyme-liked immunosorbent
assay, luego abreviado como ELISA, fue
acuñado por los investigadores suecos
Eva Engvall y Peter Perimann, los cuales
describieron el procedimiento, publicado
en 1971.
 Las aplicaciones mas interesantes se
iniciaron en el campo de la microbiología
y parasitología. ELISA
Ensayo de InmunoAbsorción Ligado a
Enzimas.
 Se

considera ligado a enzima porque una enzima
se une químicamente a un anticuerpo en las dos
versiones de la prueba (indirecta y directa)
 El inmunoabsorvente, se refiere al hecho de que
los antígenos o anticuerpos son adsorvidos a un
plástico.
ELISA puede investigar la presencia de un
antígeno o de un anticuerpo.

DEFINICIÓN

ELISA

• El ELISAse basa e el uso de antígenos o
anticuerpos marcados con una enzima, de forma
que los conjugados resultantes tengan actividad
tanto inmunológica como enzimática.


Al estar uno de los componentes (antígeno o
anticuerpo) marcado con una enzima e
insolubilizado sobre un soporte
(inmunoadsorbente) la reacción antígenoanticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto, será
fácilmente revelada mediantela adición de un
substrato especifico
• El cual al actuar la enzima, producirá un color
observable a simple vista o cuantificable mediante

Antígenos







Los antígenos son, por definición, generadores
de anticuerpos.
Incluyen proteínas, polisacáridos y varias
moléculas
pequeñas,
que
estimulan
la
producción de anticuerpos.
Los antígenos son, a menudo, moléculas que se
definen como o extrañas, para el
organismo.
Hay que actúan como
etiquetas de identificación

Anticuerpo







Son la respuesta del organismo ante la presencia de
un agente infeccioso.
Los anticuerpos son moléculas proteicas secretadas
por los plasmocitos, y tienen una altísima afinidad por
sus antígenos correspondientes.
Anticuerpos se caracterizan por:
– Ser Defensa natural
–Tener Utilidad terapéutica
– Tener Utilidad Diagnóstica
Marcador de Infección o exposición.
Detección de antígenos
Los anticuerpos utilizados en el método ELISA son de
origen monoclonal o policlonal.

Anticuerpo
Policlonales

 Anticuerpos

Heterogéneos
Reconocen epítopes diferentes del Ag
Producidos por numerosos clones de
Linfocitos B
 Anticuerpos Monoclonales
Homogéneos
Especificidad únicaProducidos por un único clon de
Linfocitos B

Controles
Se utilizan para asegurar que la prueba
esta funcionando correctamente
 Control

POSITIVO
Incluyen una sustancia que se sabe que
reaccionara positivamente,
proporcionando así, un patrón sobre el
cual basar los resultados.
 Control

NEGATIVO
Incluyen sustancias que no deben
reaccionar .

Fundamento del
ELISA
Ag o Ac
fijado a
una fase
SólidaAg o Ac
en la
Muestra

Conjugado:
Ac unido a
ENZIMA

SUSTRATO

CAMBIO
DE
COLOR

Elementos del
ELISA
FASE

SÓLIDA
Antígeno o
Anticuerpo
Conjugado: ENZIMA
SUBSTRATO

Fase Sólida
SE PUEDEN UTILIZAR DOS TIPOS DE SUSTANCIAS
 Las que favorecen la adsorción física (por fuerzas
electroestáticas) de las moléculas de Ags o Acs:
poliestireno, cloruro de polivinilo, polipropileno,
nylon y silicona.
Las que permiten la fijación covalente de esos
reactivos: acrilamida, celulosa y isoticianato
 Los
mejores resultados se obtienen con el
peliestireno
y el polvinilo, por su rigidez,
transparencia y propiedades adsortivas.

Conjugado: Enzima
La enzima escogida como marcador debe:
Unirse fácilmente a antígenos y anticuerpos,
Encontrarse en estado puro a un precio razonable y
 Tener un substratocromogénico o fluorogénico
conveniente y de fácil preparación.




Las enzimas más utilizadas
son fosfatas alcalina,
peroxidasa de rábano y ßgalactosidas

Substrato
La elección del substrato es de gran
importancia para la estandarización del
método ELISA y hay que tener varios
factores en cuenta, como son
sensibilidad, especificidad, facilidad de
lectura, así como estabilidad después de la...