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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

METODOS DE ANALISIS

PRACTICA # 3
“SEPARACION DE UNA MEZCLA DE METILENO Y FLUROCEINA USANDO CROMATOGRAFIA POR ADSORCION”

GRUPO
5QM1

SECCION
1

ALUMNA
ALEMAN MORALES JOCELYN VIRIDIANA

Fecha de entrega:6/Septiembre/2012
* INTRODUCCION
Las técnicas cromatografías se emplean para separar loscomponentes individuales de una mezcla y, en ciertos casos, para identificar un compuesto comparando su comportamiento cromatográfico con el desustancias conocidas empleadas como patrón. La base de la técnica es que cuando un determinado soluto interactúa con dos fases, una de ellas, habitualmente sólida, llamada fase estacionaria, experimenta una serie de procesos (adsorción en fase sólida, solubilizaríanen cada fase, arrastre por la fase móvil, etc.) que, en último extremo, llevan a que el soluto se reparta entre ambas fases. En el equilibrio, la relación entre las concentraciones del soluto entre ambas fases es constante, y se denomina coeficiente de reparto.
Si en una mezcla, cada componente tiene un coeficiente de reparto diferente del de los otros, la separación será buena. Naturalmente,dicho coeficiente depende de la naturaleza de las fases, así como de las condiciones de la cromatografía. Una de las técnicas cromatografías más sencillas es la que se realiza en capa fina, llamada así porque la fase estacionaria es una capa fina de un material poroso (gel de sílice, alúmina, etc.) extendida para su manejo mecánico sobre un soporte inerte. La fase móvil es una mezcla de disolventesen diferentes proporciones, que emigra por la fase estacionaria debido, sobre todo, a la capilaridad. En su movimiento, arrastra más o menos a los componentes de una mezcla en función de sus mayores o menores coeficientes de reparto. El coeficiente de reparto es poco empleado en la práctica. En su lugar, y relacionado con él, se emplea el denominado Rf, característico de cada sustancia, definidocomo la relación entre la distancia que recorre dicha sustancia y la que recorre la fase móvil. Las más insolubles tendrán, en el disolvente empleado, un Rf próximo a cero, mientras las más solubles se acercarán a uno

* RESULTADOS
Fracción (mL) | A493 | A668 |
1 | 0.024 | 0.085 |
2 | 0.008 | 0.047 |
3 | 0.331 | 0.046 |
4 | 0.652 | 0.061 |
5 | 0.688 | 0.063 |
6 | 0.686 | 0.078 |7 | 0.66 | 0.063 |
8 | 0.534 | 0.07 |
9 | 0.354 | 0.048 |
10 | 0.112 | 0.03 |
11 | 0.043 | 0.022 |
12 | 0.019 | 0.019 |
13 | 0.006 | 0.015 |
14 | -0.001 | 0.026 |
15 | -0.004 | 0.033 |
16 | -0.009 | 0.028 |
17 | 0.087 | 0.088 |
18 | 0.095 | 0.151 |
19 | -0.001 | 0.102 |
20 | -0.004 | 0.218 |
21 | 0.012 | 0.494 |
22 | 0.029 | 0.722 |
23 | 0.03 | 0.77 |
24 | 0.023| 0.744 |
25 | 0.012 | 0.674 |
26 | 0.014 | 0.558 |
27 | 0.008 | 0.412 |
28 | -0.001 | 0.271 |
29 | -0.017 | 0.176 |
30 | -0.019 | 0.094 |
31 | -0.024 | 0.053 |
32 | -0.02 | 0.034 |
Tabla 1. Valores de absorvancia obtenidos para la separacion de fluoresceina y azul de matileno


Imagen 1. Grafica del espectro de absorvancia de la fluroesecina y el azul de metileno a 493nm y 668 nm
* Los elemtos de la cromatofrafia en columna son:
La columna de vidrio: es el soporte donde se hara la reaccion
La fase estacionaria: es aquella que por medio de sus moleculas pasara la muestra
La fase movil: Es aquella quehara que se arrastre la mesutra por los poros
La muestra: aquello que se va a separar

* Adsorción: fenomeno de superficie en la cual las moleculasen solucion tienden a agruparse sobre la superficie de un solido poroso o una interface en forma irreversible.


Fluoresceína azul de metileno
Esto se debe a las cargas de electrones y protones de la sustancias

* Podemos invertir el orden de las fases ya que la polaridad de las sustancias nos...
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