Espectrofometria



  ESPECTROFOMETRÍA

Duván A. García-Ramírez (duvancho_garcia@hotmail.com), Paulo A. Vélez (pav5@hotmail.com).
Departamento de Biología, Universidad del Valle, Edificio 320 - Ciudadela Universitaria Meléndez, Cali, Colombia

RESUMEN
Se experimentó con el método de Espectrofotometría, el cual se basa en la propiedad que tienen las sustancias en absorber rangos específicos de longitudesde onda. Se realizaron curvas de absorción cada 30nm en el espectro de luz visible al ojo humano (400-700nm) y posteriormente se realizó la comprobación de la ley de Beer-Lambert con 5 sustancias: azul de bromotimol (2 tipos: una a pH 7.5 y otra a pH Acido), rojo congo, mezcla de azul de bromotimol 50% y rojo congo a 50% (2 experimentos) y permanganato de potasio. Los resultados responden alpatrón esperado menos para Rojo Congo, en los experimentos realizados para la determinación de su espectro de absorción, aparece un pico muy bajo de 0,175nm, frente a un pico de 0.417nm en azul de bromotimol, lo que se correlaciona con poco notoria curva en la titulación de la mezcla de azul de bromotimol con rojo congo, se plantea que este resultado se debió a una baja concentración en la solución deRojo Congo, pues aparece una curva en el rango del espectro esperado pero con datos bajos.

Palabras Clave: Absorbancia, Clorimetría, Trasmitancia, Beer-Lambert, Cromóforos.



INTRODUCCION
La colorimetría es la técnica más usada para la determinación de la concentración de un compuesto o de un grupo de compuestos en solución. Esta técnica se fundamenta en que al pasar la luz a través de unasustancia coloreada esta absorbe solamente algunas longitudes de onda: según la ley de Beer-Lambert al ocasionar que un rayo de luz monocromático pase a través de un medio absorbente la intensidad lumínica de este disminuye según la concentración y la cantidad del medio usado( la Intensidad de los colores es directamente proporcional a la concentración y a la cantidad de luz absorbida por elcompuesto a trabajar), pero esta tiene ciertas restricciones en lo que respecta a los límites de concentración. Un espectrómetro es una versión más sofisticada del colorímetro, en este la luz monocromática es obtenida por medio de una rejilla y un prisma. Estas técnicas son útiles en la identificación de sustancias gracias a que la mayoría de compuestos tienen espectros de absorción característicos enlas regiones visible y ultravioleta. El azul de bromotimol y el rojo congo son colorantes muy utilizados en la tinción de células y tejidos por lo cual son bastante óptimas para realizar pruebas de colorimetría gracias a su coloración y a su capacidad de transmitir este a través de medios físicos.
Por medio de un espectro de absorción, se determina la longitud de onda óptima de absorción de unasustancia dada. El espectro de absorción de una sustancia se obtiene midiendo la absorbancia de la muestra a diferentes longitudes de onda; si se trabaja en el espectro visible, el rango de medición desde 400nm hasta 700. Luego, se grafica la absorbancia versus la longitud de onda, y se encuentra la longitud de onda que corresponde con el punto máximo de absorción de la muestra. El espectro deabsorción es característico para cada sustancia y la forma de la curva es igual para una misma sustancia a diferentes concentraciones (Quesada, 2007).

Todas las moléculas son capaces de absorber radiaciones electromagnéticas de una frecuencia o de un intervalo de frecuencias característicos de cada molécula. La ley de Beer-Lambert estableces que la absorbancia está directamente proporcional conlas propiedades intrínsecas del analíto, con su concentración y con la longitud de trayectoria del haz de radiación al atravesar la muestra. Es una combinación de leyes, la ley de Lambert que predice el efecto del recorrido de la radiación sobre la fracción de una radiación absorbida. Por otro lado la ley de Beer predice el efecto de la concentración en un sistema sobre la fracción de radiación...