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Química Clínica

Manual de Prácticas de Laboratorio

Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez

PRACTINA NO________ DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA (ALP) INTRODUCCION La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. Hidroliza los monoésteres del ácido ortofosfórico en medio alcalino. En el adulto proviene en parte del higado (termoestable) y en parte de hueso, sistemareticuloendotelial y vascular (termolabil) dando lugar a distintas izoenzimas. La actividad serica de ALP ósea, en condiciones normales alcanza su mayor actividad en los niños en edad de crecimiento, llegando a triplicar los niveles del adulto, debido a que esta izoenzima se localiza en los osteoblastos. También es fisiológico el aumento que se produce al final de primer trimestre de embarazo, aexpensad de la izoenzima placentaria que en este periodo alcanza niveles máximos. Entre las patologías que afecta la actividad sérica de ALP se pueden citar: carcinomas metastáticos en higado y hueso, colestasis biliar, infarto al miocardio, pulmonar o renal. FUNDAMENTO La ALP hidroliza al p-nitrofenilfosfato, incoloro, produciendo fosftato y p-nitrofenil a pH de 9.8, la velocidad de aparicion delanion p-nitrofenolto a 405nm, es proporcional a la actividad enzimatica en la muestra. La dietanolamina regula en pH de reaccion y actua como aceptor del fosftato liberado por la fosfatasa. ALP + p-NFF  PO4 + p-Nitrofenol (pH 9.8) Esta prueba se realiza en el contexto de otras pruebas hepáticas (GOT, GPT, Bilirrubina, GGT) y se utiliza para evaluar problemas hepáticos. Suele asociarse en laelevación de GGT excepto en problemas óseos donde solo se eleva la ALP. REACTIVO Buffer DEA : dietanolamina Sustrato pNFF MUESTRA Suero MATERIAL • Espectrofotómetro y cubetas • Baño maria • Agua destilada • Pipetas • Estandar de calibración • Reactivos de ALP

Química Clínica

Manual de Prácticas de Laboratorio

Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez

PARAMETROS Longitud de onda Temperatura dereacción Tiempo Vol final de reacción

405nm 25, 30 o 37ºC 3 minutos 2.52mL

PROCEDIMIENTO Colocar en cubeta a temperatura de Reaccion: Sustrato reconstituido 2.5mL Preincubar unos minutos, después agregar Muestra 20uL • • Leer absorbancia inicial en espectro a 405nm, disparar cronómetro Registrar absorbancias después de 1,2 y 3 minutos después de la primera lectura. Determinar la diferencia promediode Absorbancia / min (∆A/min), restando cada absorbancia y obteniendo el promedio.



CALCULOS ALP (U/I) = ∆A/min x 6812

RESULTADOS ALP= ______________ (U/I) VALORES DE REFERENCIA Adultos: Niños y adolescentes 25ºC = 40-190 U/I hasta 400 30ºC = 45-213 U/I hasta 450 37ºC = 65-300 U/I hasta 645 CONCLUSIONES

Química Clínica

Manual de Prácticas de Laboratorio

Eduardo OtonielBermúdez Chávez

PRACTICA NO. ____ DETERMINACION DE CREATININA DEPURACION DE CREATININA INTRODUCCION La determinación de niveles séricos de creatinina, producto de la degradación de la creatina, se utiliza como índice de funcionalismo renal, dado que su eliminación se efectúa a través del riñón y casi exclusivamente por filtración. FUNDAMENTO La creatinina reacciona con el picrato alcalino, según lareacción de Jaffé, para dar un cromógeno rojizo. La cantidad de cromógeno que se forma bajo condiciones controladas, es directamente proporcional a la concentración de creatinina en la muestra y se mide fotométricamente a 490-510nm. La reacción de jaffé es una reacción no específica para creatinina, pero las otras sustancias que reaccionan con el picrato alcalino, lo hacen durante los primeros 30segundo de iniciada la reacción. MATERIAL REQUERIDO • Espectrofotómetro • Cubetas de lectura • Material volumétrico • Sistema de termostatizacion (20-30ºC) • Cronómetro PARAMETROS Longitud de onda Temperatura Ajuste a cero PROCEDIMIENTO Pipetear en cubetas Estandar Muestra espectrofotométricas: Reactivo de Trabajo 2.0mL 2.0mL Equilibrar a temperatura de trabajo y pipetear Estandar 0.4mL Muestra...
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