Estracion de la ureasa

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INFORME DE LABORATORIO NO. 2 DE BIOQUIMICA

ESTUDIO CINÉTICO DE LA UREASA

Presentado por:

JOHN EDWAR LOAIZA
MARÍA YECID BARRERA
SANDRA ROJAS TRIANA
RAFAEL IGNACIO BERNAL
CONSUELO RÍOS

Presentado a:

ALBA PINZÓN

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA “UNAD”
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
PROGRAMA TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA
CEAD JOSE ACEVEDO Y GOMEZ
SANTA FE DEBOGOTA
Mayo de 2009

INTRODUCCION

La ureasa se produce a partir de Lactobacillus fermentum. Dicha enzima pertenece al grupo se las ureasas denominadas « ureasas ácidas”. Se activa a pH bajo.

Lactobacillus fermentum se cultiva en medio sintético. Después de la fermentación se filtra el cultivo, se lava con agua y las células se matan en alcohol de 50 % vol. La suspensión se seca porliofilización o por pulverización.

La preparación consiste en un polvo formado por células muertas enteras que contienen la enzima.

La ureasa no debe contener ni substancias ni microorganismos ni actividades enzimáticas colaterales que puedan ser perjudiciales para la salud,
-ser perjudiciales para la calidad de los productos tratados,
-llevar a la formación de productos indeseables,
-ocasionar ofacilitar un fraude.

La ureasa se presenta bajo forma de polvo cristalino, blanco, inodoro, de un sabor más bien dulce.

La función de la enzima es degradar la urea en amoníaco y dióxido de carbono

PRÁCTICA NO. 7

ESTUDIO CINÉTICO DE LA UREASA

OBJETIVOS

• Determinar el efecto del pH, la concentración del sustrato y la temperatura sobre la velocidad de la reacción enzimática de laureasa.

• Determinar la presencia de ureasa en leguminosas y tortas de oleaginosas midiendo su actividad biológica.

1. FUNDAMENTO TEÓRICO

El estudio cinético persigue la caracterización de la actividad catalítica de la enzima, determinando las condiciones óptimas bajo las cuales presentan la mayor actividad.

La ureasa es una enzima muy difundida en el reino vegetal especialmente ensemillas de leguminosas (soya, canavalia). Esta enzima cataliza la siguiente reacción:
[pic]
Un buen método para seguir el curso de la hidrólisis es la titulación del NH3 producido con un ácido de normalidad conocida y en presencia de un indicador adecuado.

Esta enzima tuvo mucha importancia en el desarrollo de la enzimología moderna ya que merced a los trabajos de Summer fue la primera aisladay cristalizada. La ureasa tiene un PM de 483000, consta de 6 subunidades estructurales iguales y es de las enzimas que exhibe especificidad absoluta por su sustrato.

Las investigaciones sobre la ureasa también permitieron deducir un principio importante de las reacciones enzimáticas como es la función de los grupos -SH (sulfidrilo) en ciertas enzimas. La ureasa posee 3 o 4 grupos sulfidrilosactivos, siendo un representante de un gran número de enzimas cuya actividad depende de la existencia de grupos -SH intactos formando parte de la cadena peptídica de la enzima como cisteina.

La oxidación de estos grupos puede ocasionar una inactivación reversible de la enzima. Por ejemplo:
[pic]
Estas formas E—S—S—E inactivas muy probablemente pueden ser reactivadas mediante el efecto decompuestos ricos en -SH, como el glutatión o la cisteina.

[pic]

Una alteración más estable, en particular en el caso de la ureasa, es la reacción de los grupos -SH con ciertos iones de metales pesados como Hg++, Ag+ o Cu++, formando una mercáptida:
[pic]

CINÉTICA. Es la velocidad de reacción química se puede medir como la velocidad de formación de uno o más de su productos.

UREASA. Es unaenzima que cataliza la hidrólisis de urea a dióxido de carbono y amonio.

2. REACTIVOS

• Solución de Ureasa en buffer fosfato 0.05 M y pH 6.3
• Buffer fosfato 0.05 M, a pH 5.0; 6.0; 7.2; 8.0 y 10.0.
• Solución de Urea 0.25 M
• Solución de HgCI2 al 1%
• Indicador de tashiro
• Solución de HCI aproximadamente 0.1 N (titulada exactamente)

3. PROCEDIMIENTO

El trabajo experimental se...
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