estudiante

PRACTICO N° 1

Técnicas para el cultivo de microorganismos
Las técnicas básicas para el manejo de microorganismos en el laboratorio persiguen trabajar en condiciones de asepsia y cultivar, observar y aislar los microorganismos de interés.
Asepsia significa eliminar todos los microorganismos del ambiente para garantizar que los microorganismos analizados correspondan a la muestra en estudio.El mecanismo más utilizado para lograr condiciones de asepsia en un laboratorio microbiológico es la esterilización de todo el material con el que se trabaja.
Esterilización
Esterilizar consiste en eliminar todos los organismos vivos. Los métodos de esterilización más comunes son:
1. Esterilización por calor
El tiempo necesario para esterilizar el material en cuestión depende de distintosfactores. El más importante es la temperatura: el tiempo de esterilización será más corto cuanto mayor sea la temperatura. Otros factores que influyen en el tiempo de esterilización son:
La naturaleza del calor: el calor húmedo posee mayor poder de penetración que el calor seco.
El tamaño de la población: el tiempo requerido para eliminar todas las células de una gran población es mayor que elnecesario para eliminar las de una población más pequeña.
El tipo de célula: a diferencia de las células vegetativas, las endósporas bacterianas son altamente resistente al calor
El contenido de humedad: los cuerpos secos son más resistentes al calor que los húmedos. La esterilización de objetos secos requiere temperaturas más altas y tiempos más prolongados que la esterilización de los objetoshúmedos.
Existen diferentes métodos de esterilización por calor:
a) Esterilización por calor húmedo: se fundamenta en esterilizar por efecto del vapor de agua a presiones superiores a la atmosférica. El vapor saturado se condensa sobre los objetos líquidos compensando la cantidad de agua que se evapora. De esta manera los materiales esterilizados no se deshidratan. La esterilización por calorhúmedo se realiza mediante autoclaves.
El autoclave es un aparato hermético que permite trabajar con vapor de agua a presión. El uso de calor húmedo facilita la muerte de todos los microorganismos, particularmente las endosporas resistentes al calor. El procedimiento consiste en calentar el agua en el recipiente hermético hasta que llegue a 1.1kg/cm2 de presión de vapor, lo que proporciona unatemperatura de 121°C. A esta temperatura el tiempo de esterilización requerido es de 20 minutos. Si se van a esterilizar objetos muy voluminosos el tiempo de esterilización debe ser más largo. Lo que provoca la muerte de los microorganismos no es la presión del autoclave, sino la elevada temperatura que se logra con la presión.
Los autoclaves poseen normalmente indicadores de presión (manómetros) y no detemperatura. La presión de vapor se corresponde con la temperatura cuando el vapor es puro y no esta mezclado con aire. Para lograr la correspondencia entre presión y temperatura debe tenerse especial cuidado de “purgar” el autoclave hasta que salga todo el aire del recipiente hermético.
Para permitir la libre circulación de vapor, los tapones utilizados en los frascos, tubos, etc. y lospapeles para las envolturas deben ser de material permeable. Los recipientes que se utilicen para esterilizar medios de cultivo u otros materiales líquidos deben llenarse hasta la mitad de su volumen para permitir una buena circulación del vapor. El autoclave solo debe abrirse cuando la presión del manómetro baje a cero.
b) Esterilización por calor seco: debido a que la conducción del calor es maslenta en el aire que en el vapor, para esterilizar con calor seco se requiere mayor intensidad de calor y mayor tiempo de esterilización. Otro factor importante para el tiempo de esterilización es que la sobrevivencia de las bacterias es mayor en estado seco. Las estufas de esterilización se utilizan para esterilizar material de vidrio y otros materiales resistentes a elevadas temperaturas. La...