Estudio de las modificaciones oxidativas de la ldl: análisis del componente lipídico y proteico.

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PRÁCTICO DE BIOQUÍMICA 2011 --- CBCC5

INTEGRANTES:
Jimena Gonzáles Giuilliana Hernández Paola Curbelo Leticia Gómez GRUPO:B6

Introducción:
LDL Las lipoproteínas de baja densidad (LDL), son partículas que tienen un diámetro de 19- 25 nm y una densidad entre 1.019 y 1.063, compuestas por una parte lipidica que consta fundamentalmente de esteres de colesterol y triacilgliceridos,aproximadamente en un 47% y una parte proteica compuesta por la apoproteína B-100, esta se sintetiza en el hígado, es esencial para la síntesis y secreción de las lipoproteínas, constituye el factor de reconocimiento de las LDL por receptores específicos que se encuentran tanto en el hígado como en tejidos extrahepáticos y de esta manera desempeña un papel fundamental en la captación del colesteroltransportado en dicha lipoproteína por los tejidos. Además esta compuesta por antioxidantes como alfa-tocoferol, beta-caroteno, ubiquinol-10, siendo el mas abundante alfa-tocoferol. LDL también es el producto final de la acción de LPL (lipoproteína lipasa) sobre la VLDL, en un proceso complejo y con participación de otros factores, en donde las LDL formadas son de mayor tamaño y menor densidad que susantecesores. PROCESO DE OXIDACIÓN LIPÍDICA La lipoperoxidación es el conjunto de reacciones autoxidativas (agregado de oxigeno molecular) que produce la degradación de ácidos grasos polietilénicos (poliinsaturados, LH) con formación de peróxidos, hidroperóxidos (LOOH), aldehídos y cetonas alifáticas. Esta consta de tres fases: iniciación, propagación y terminación. La fase de iniciación es el pasocritico, en donde se forma el radical alquilo (L) a partir de un iniciador que causa la abstracción del hidrogeno. El radical alquilo reacciona con el oxigeno molecular si este esta presente, dando como resultado el radical peroxilo (LOO), esto forma la fase de propagación, en donde una vez formado radical peroxilo continuara la cadena de reacciones oxidativas abstrayendo átomos de hidrogeno agrupos alquilo. Esta fase continúa siempre que se encuentren disponible O2 y sustratos lipidicos insaturados. La fase de terminación consiste en la formación de productos no radicales, es decir la reacción entre dos radicales alquilo, o dos de peroxilo.

Objetivo general: Estudiar la oxidación de LDL in Vitro (por Cu) utilizando diferentes metodologías experimentales y analizar las modificacionessufridas de los tres principales componentes de la lipoproteína: lípidos, apo B100, y antioxidantes.

Objetivos específicos: 1-Determinar la oxidación lipidica de LDL y su consumo de oxigeno. 2-Determinar la oxidación de antioxidantes endógenos (oxidación de carotenoides) 3-Determinar la oxidación del componente proteico.

Metodología utilizada: Para cada uno de los objetivos se utilizo unametodología específica. 1- Para la oxidación lipidica el método utilizado fue oximetría. La cual consiste en la determinación de la cantidad de oxígeno contenida en un gas o en un líquido. 2- Para la oxidación de carotenoides se utilizó el espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, yuna que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. 3-Para la oxidación del componente proteico se utilizo el método de electroforesis, es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.

1- Oxidación lipídica de LDL y su consumo de oxigeno
Paramedir el consumo de O2 utilizamos una cámara de 4ml de volumen final a una temperatura de 25º y agitación constante. Por medio de una pipeta Pasteur se realizo un burbujeo durante algunos minutos para saturar la cámara de agua con aire y calibrar el aparato al 100% de O2.Esta calibración depende de la temperatura que se trabaje para obtener la concentración de O2: Temperatura (ºC) O2 nmoles/ml...
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