Estudio de maiz

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Introducción
La mayoría de los procedimientos de modificación genética requieren técnicas eficientes de regeneración de plantas. Las plantas de maíz pueden ser regeneradas tanto por organogénesis como por embriogénesis somática (Armstrong, 1994) (La embriogénesis somática es el proceso por el cual las células somática adquieren estados embriogénicos característicos sin que exista fusión degametas, y dan lugar a la formación de plantas completas); en ambos casos, la respuesta a la regeneración en el cultivo de tejidos es muy dependiente del genotipo (Armstrong et al., 1992; Hodges et al., 1986; Pareddy y Petolino, 1990). El híbrido A188/B73 se ha usado frecuentemente en los estudios de embriogénesis somática de maíz porque produce fácilmente callos embriogénicos tipo II (tejidodesdiferenciado, muy friable, altamente embriogénico), los cuales constituyen un excelente material para la iniciación de suspensiones celulares (Armstrong, 1994), y tiene además una alta capacidad de regenerar plantas (Hodges et al., 1986). Esta alta respuesta embriogénica del híbrido A188/B73 fue asociada a 5 genes presentes en el genoma de la línea A188 (Armstrong et al., 1992), además de lascaracterísticas de friabilidad que aporta el componente parental B73 (Tomes y Smith, 1985).
 
Los embriones cigóticos inmaduros (son los que provienen de un proceso de fecundación natural y se aislan del grano entre 11 y 14 días después de la polinización) fueron los explantos generalmente elegidos como material de partida para iniciar cultivo de tejidos de maiz (Armstrong 1994). Sin embargo, otras fuentesde explantos tales como inflorescencias inmaduras (Pareddy y Petolino, 1990; Songstad et al., 1992), segmentos basales de hojas (Conger et al., 1987) y embriones cigóticos maduros (Wang, 1987) fueron también satisfactoriamente usadas. La optimización de diferentes variables que afectan la regeneración de plantas por embriogénesis somática en maíz fueron estudiadas por varios investigadores,quienes modificaron los componentes de los medios de cultivo y las condiciones ambientales para aumentar la eficiencia de la regeneración de plantas. La presencia de L-prolina parece ser esencial para inducir exitosamente la formación de callos tipo II cuando este aminoácido es adicionado al medio basal N6 (Armstrong, 1994). Songstad et al. (1991) demostraron la importancia de controlar el efecto deletileno por adición de NO3Ag en el medio de cultivo. Un pretratamiento con inhibidores de la biosíntesis de poliaminas en el medio de mantenimiento embriogénico también mejora la regeneración de plantas de callos cultivados por largos períodos de tiempo (Tiburcio et al., 1991). Emons et al. (1993) estudiaron la influencia de diferentes fuentes carbonadas tales como sacarosa o manitol, u otrassustancias como L-prolina, ácidos abscísico y giberélico en el medio de cultivo de embriones somáticos de maíz derivados de suspensiones celulares.
 
Emons et al. (1993) y Fransz y Schel (1990) demostraron que el desarrollo de los embriones cigóticos y somáticos es análogo. En el contexto de esta analogía, el objetivo del presente trabajo consistió en desarrollar un protocolo optimizado deregeneración de plantas de maíz por embriogénesis somática, considerando el fenómeno completo en tres etapas o procesos parciales: i) inducción de la embriogénesis somática, ii) maduración de los embriones somáticos formados, y iii) germinación de los embriones somáticos maduros. Para ello, hemos evaluado diferentes condiciones en cada etapa variando el tipo y concentración de reguladores de crecimiento uotros aditivos tales como hidrolizado de caseína o NO3Ag. Finalmente, mostramos que la respuesta embriogénica depende de la dirección del cruzamiento entre las líneas parentales intervinientes del híbrido.
 
 
Materiales y Métodos
Se cosecharon espigas de los híbridos A188/B73 y B73/A188 a los 11-14 días después de la polinización, se esterilizaron superficialmente con etanol (70 % V/V, 1...
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