Etica socratica

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Tecnologías de marcadores moleculares para estudios de diversidad genética de plantas: Módulo de aprendizaje

Tecnologías basadas en las proteínas
Isoenzimas

Derechos de Autor: IPGRI y Cornell University, 2003

Isoenzimas 1

Contenido
Detección de isoenzimas
• Metodología • Electroforesis

Equipo Tecnología de los isoenzimas en imágenes Interpretación de las combinaciones de bandasVentajas y desventajas Ejemplos de aplicaciones
• Lysimachia sp. • Fríjol Lima • Cebolla
Derechos de Autor: IPGRI y Cornell University, 2003 Isoenzimas 2

Detección de los isoenzimas: Metodología
Tratamiento del material vegetal Electroforesis en geles de almidón o de acrilamida Tinción histoquímica Análisis de los patrones de bandas

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Los extractos crudos se someten a electroforesis en geles de almidón o de acrilamida y se tratan con tinciones específicas del enzima. El resultado es un patrón de bandas relativamente sencillo. La variación observada en los patrones de bandas entre los individuos analizados puede interpretarse genéticamente, tal como se haría con cualquier otro marcador fenotípico.

Detecciónde isoenzimas: Electroforesis (1)
En este proceso se aplica una corriente eléctrica que favorece la separación de moléculas por su carga y por su tamaño La corriente hace que las moléculas se muevan a través de los poros del gel La sustancia que constituye el gel se escoge de modo que sus poros sean de un tamaño apropiado para poder separar moléculas de tamaños y formas específicos
Derechos deAutor: IPGRI y Cornell University, 2003 Isoenzimas 4

La electroforesis es una técnica cromatográfica que permite separar mezclas de compuestos iónicos. Se ha adoptado como una herramienta común para el análisis bioquímico.

Detección de isoenzimas: Electroforesis (2)

Cargando las muestras

+

Corriente eléctrica

Gel

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Las proteínas son el producto primario de los genes. Cuando cambia la secuencia de nucleótidos del ADN, también cambian los patrones de bandas de las proteínas. La electroforesis de los enzimas puede revelar directamente el polimorfismo genético puesto que exhibe las formas múltiples de un enzima específico.

Equipo
Recursos:
• Agua destilada o desionizada (o ambas) • ReactivosEquipo:
• Refrigerador y congelador • Fuente de energía eléctrica • Hornillo o microondas • Guantes gruesos de algodón • Medidor de pH • Balanzas • Moldes para solidificar el gel • Matraces volumétricos y de succión

Derechos de Autor: IPGRI y Cornell University, 2003

Isoenzimas 6

La tecnología de isoenzimas en imágenes

Las siguientes fotografías ilustran las etapas de laboratorionecesarias para detectar isoenzimas

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Isoenzimas 7

Cortesía del Dr. Pere Arús, IRTA, España

Derechos de Autor: IPGRI y Cornell University, 2003

Isoenzimas 8

El técnico de laboratorio está pipeteando la solución tampón de extracción sobre una sección de hoja. Cada muestra se coloca en una bandejita plástica, de las que suelen usarse parapesar productos químicos. Se pueden usar otros utensilios como placas de vidrio, siempre y cuando estén muy limpios y no permitan la absorción del tejido macerado.

Cortesía del Dr. Pere Arús, IRTA, España

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Una vez el tampón de extracción se ha colocado sobre la muestra, ésta se machaca con una varilla de metacrilato paralograr la rotura completa del tejido y su homogeneización con la solución tampón. Esta operación debe hacerse lo más rápidamente posible para evitar un aumento de temperatura. Mientras se machacan todas las muestras, las bandejitas plásticas se van colocando sobre una capa de hielo.

Cortesía del Dr. Pere Arús, IRTA, España

Derechos de Autor: IPGRI y Cornell University, 2003

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