Extraccion de adn

Universidad de la frontera

Biotecnología.

Facultad de ciencias agropecuarias y forestales.

Informe laboratorio

Ciencia y producción animal: extracción de ADN.

Macarena Abarzúa.

Biotecnología.

Objetivo.

- Extracción y confirmacion (de manera práctica) de ADN en leucocitos de la sangre de unaborrega.

Objetivos específicos:
- Conocimiento de las diferentes técnicas y metodología que se utiliza para la correcta extracción de sangre y ADN con soluciones específicas (Chomnzynski).
- Observar y comprender los procesos por los que se somete a las muestras de ADN.
- Analizar y concluir resultados de acuerdo a los procedimientos realizados a las muestras. de AtDN.Introducción.
Existen dos formas de ácidos nucleicos: los acido ribonucleicos ARN y ácidos desoxirribonucleicos ADN. Ambos son largas cadenas de nucleótidos compuestos de tres partes. En primer lugar un azúcar simple: dosoxirribosa para el ADN. Enseguida aparece una base nitrogenada que puede ser purina (adenina A – guanina G) o pirimidina (timina T - citocina C).
La carga de estaspartículas es la carga neta y depende de la solución en la que se encuentre disuelta. Las partículas que pueden tener cargas positivas y negativas se denominan “Switer Iones” entre los que se encuentran aminoácidos, proteínas, alcaloides, etc. Existen sustancias las cuales están exclusivamente cargadas positivamente o negativamente, lo que facilita su separación como lo son los ácidos nucleicos, ácidos obases orgánicos y fenoles entre otros.
Al momento de centrifugar una muestra la velocidad de sedimentación depende de la densidad de estas partículas, es así que las más densas se sedimentan primero, seguidas de las menos densas y las muy ligeras pueden incluso permanecer en suspensión.
Es de importancia decisiva el equilibrio de la carga de la centrifugadora en todo momento; cuandohay que centrifugar un número impar de muestras se debe incluir un tubo con un volumen apropiado de agua que nivele el peso.
En el caso particular de la Biología Molecular, la electroforesis es utilizada para el análisis de ácidos nucleicos. La técnica permite la separación de fragmentos de DNA que no pueden ser separados adecuadamente mediante otros procedimientos como la centrifugaciónen gradiente de densidad.
  Se utilizan geles como la agarosa que forma una matriz que sirve o actúa como un cedazo molecular para separar fragmentos de DNA de diferentes tamaños.
El tamaño de los fragmentos analizados está en el rango de los 150 bp a 2500 bp. Para la separación de fragmentos de alto peso molecular se debe usar bajas concentraciones de agarosa, para la separación defragmentos pequeños se usan altas concentraciones de agarosa.
Los geles de agarosa deben incluir en este caso es un agente intercalante usado comúnmente como marcador de ácidos nucleicos en laboratorios de biología molecular para procesos como la electroforesis en gel de agarosa. Cuando se expone esta sustancia a luz ultravioleta, emite una luz roja-anaranjada, que se intensifica unas 20veces después de haberse unido a una cadena de ADN. Como el bromuro de etidio se intercala en el ADN, esta sustancia tiene un poderoso efecto mutágeno y, posiblemente puede ser cancerígeno

El gel de agarosa con el bromuro de etidio debe cubrirse completamente con un buffer TAE es el buffer más comúnmente empleado para la separación de fragmentos de DNA por electroforesis. Este buffer poseeuna fuerza iónica baja al igual que una pobre capacidad de amortiguación de pH. El mejor para el análisis electroforético de fragmentos grandes (> 20 kb) de DNA

Buffer de Carga que contiene sucrosa o glicerol, lo cual da peso a la muestra para que el DNA se precipite al fondo de los pozos de siembra y los colorantes (azul de bromofenol, cylen xyanol, naranja de acridina, etc) permiten...