extraccion de adn

“OBTENCIÓN
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA “OBTENCIÓN DE DNA
MICROBIANO POR EL MÉTODO DE HERVIDO Y
Tm”
DETERMINACIÓN DE Tm”

LOGO DE LA
UNIVERSIDAD

Nombre de la asignatura:

Genética MolecularNombre de la Unidad de
Aprendizaje:

1

Nombre de la práctica o
proyecto:

Obtención de DNA microbiano por el método de hervido y determinación
de Tm

Número:

1/1

Requerimientos(Material
o equipo):

Duración (horas) : 3 horas

Material
1 Asa de siembra
4 Tubos Eppendorf de 1.5 mL estériles.
1 Micropipeta
Puntas desechables estériles
1 Baño María
Materialbiológico
Escherichia coli

Reactivos
Agua molecular estéril
Solución salina
Equipo
Incubadora
Espectrofotómetro
Centrífuga
Parrilla

Actividades a desarrollar en la práctica:
DNA:
A. Obtenciónde DNA:
1. Colocar en cada uno de los tubos (4 tubos por equipo) 100 µl de agua.
2. Tomar con un asa de siembra unas colonias de la placa de agar e introducirlas en el tubo, con
la ayuda de lamicropipeta y una punta homogenizar hasta formar una suspensión.
3. Calentar a 100 °C por 15 minutos en un Baño maría.
4. Añadir 900 µl de agua a cada tubo y homogenizar.
5. Centrifugar durante 5min. a 12 000 rpm.
6. Recoger el sobrenadante en un tubo estéril.
B. Determinación de la Tm:
1. Una muestra de DNA aislado y disuelto en solución salina, se diluye de tal manera que se
obtenga unD.O. entre 0.8 y 1.0.
2. Calentar la solución de los tubos en un baño maría, tomando las lecturas del
espectrofotómetro a 260nm. Se toma como temperatura inicial la ambiente y después
calentar a lastemperaturas indicadas en la tabla siguiente.

1

Temperatura (ºC)
Ambiente
50
55
60
65
70
75
80
85
90
100

D.O. (260 nm)

Realizar una gráfica con los datos obtenidos deabsorbancia y temperatura.
Reportar cuál es su Tm del microorganismo.
CUESTRIONARI O
1. Explicar el fundamento de absorción a 260 nm (espectro de absorción de cada una de las
bases nitrogenadas).
2....