Extraccion de una solucion invertasa

* ESCUELA:
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE ALIMENTOS

* CURSO:
BIOQUÍMICA GENERAL
* TEMA:
EXTRACION DE UNA SOLUCION ENZIMATICA DE INVERTASA

* PROFESOR:
ALICIA DECHECO EGUZQUIZA




* HORARIO DE LABORATORIO: MESA:90G “B”

I. INTRODUCCIÓN

En esta práctica podremos observar las diferentes reacciones que los azúcares presentan al ponerlos   en contacto con el reactivo Benedict, se realizaron pruebas para determinar la presencia de azúcares reductores y no reductores. Los azúcares reductores son los azúcares que su carbonoanomérico se encuentra libre por lo que reacciona con este reactivo. Lo demostrado en la práctica nos indica que la glucosa, fructosa, maltosa y lactosa si son reductores ya que se presente un cambio de coloración (color naranja) lo que nos indica que si reaccionó con el reactivo, siendo la fructosa el primer azúcar en reaccionar, esto es provocado porque es una pentosa lo cual le permite un menortiempo de reacción.
Otra reacción que se observará, es la de la sacarosa (azúcar no reductor) con el reactivo de Benedict. La sacarosa se hidrolizará y por ende la prueba de Benedict será positiva, ya que el reactivo convertirá a la sacarosa en un azúcar reductor.

II. OBJETIVO

* Aislar la enzima invertasa mediante una técnica de extracción.

* Determinar la inversión de lasacarosa en las muestras analizadas: caña de azúcar, gomitas, mermelada cacera, mermelada industrial y azúcar rubia.

III. MARCO TEÓRICO



La invertasa (β-D-fructofuranosidasa, β-D-fructofuranósido fructohidrolasa, EC 3.2.1.26), cataliza la hidrólisis de restos terminales no reductores β-D-fructofuranosídicos de fructofuranósidos. Entre los sustratos sobre los que actúa el mássignificado es, sin duda, la sacarosa, de ahí que el enzima se designe con el nombre de sacarasa. La denominación trivial de invertasa, con la que también se conoce, hace referencia al hecho de que los productos de la reacción son conocidos desde antiguo como “azúcar invertido” ya que mientras la sacarosa es dextrorrotatoria, la mezcla equimolecular de glucosa y fructosa que resulta de su hidrólisis eslevorrotatoria, por lo que en el proceso se origina un cambio de signo (de positivo a negativo) del valor de rotación óptica.

Sacarosa ([α]D= +66,5º) + H2O →
D-glucosa ([α]D= +52,5º) + D-fructosa ([α] D= -92º)

La invertasa es un enzima ampliamente distribuido, estando presente tanto en microorganismos como en animales y vegetales, jugando un papel importante en el catabolismo defructanos y más específicamente en el de la sacarosa, en especial en aquellos organismos en los que dichos azúcares son utilizados como fuente de carbono y energía.
El estudio de la actividad invertasa presenta un gran interés tanto desde un punto de vista académico como de investigación aplicada, siendo uno de los enzimas más conocidos. A modo de ejemplo podemos referir que la invertasa fue el primerenzima cuya cinética se estudió en profundidad (estudios clásicos de Michaelis-Menten) y que fue utilizado industrialmente.
Para la determinación de la actividad invertasa se utilizará un ensayo indirecto en el que los productos de reacción serán detectados espectrofotométricamente tras su conversión en derivados coloreados. En concreto, la extensión de la hidrólisis enzimática de sacarosa(azúcar no reductor) en glucosa más fructosa (azúcares reductores) se valorará mediante uno de los diversos métodos existentes para la estimación de azúcares reductores. Nos referimos exactamente al método del ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS), el cual se basa en la reducción del DNS (de color amarillo) por la glucosa u otro azúcar reductor al ácido 3-amino-5-nitrosalicílico (de color rojo ladrillo)...