Extraccion Del Adn De La Cebolla

COMPARACION DE DOS METODOS DE EXTRACCIÓN DE ADN DE UNA CEBOLLA



|RESUMEN | |DEISY BIBIANA CALLE |
|La extracción de ADN vegetal debe hacerse en una serie de etapas: se debe romper la membrana | |Estudiante |
|plasmática de lacélula, en el caso de los vegetales también se debe romper la pared celular, se | |Universidad Tecnológica de Pereira |
|debe romper la membrana nuclear para dejar libre el ADN y este se debe proteger de enzimas que | |deisybcallep@hotmail.com |
|pueden degradarlo y se aísla precipitándolo en etanol. Se realizó la práctica llevando a cabo dos | ||
|protocolos, en el protocolo uno se utilizaron los buffer uno y dos, para el protocolo dos se | |CARLOS ANDRÉS TORO |
|utilizó el buffer tres. Después de aisladas las muestras se midió espectrofotométricamente a 260 nm| |Estudiante de Química industrial. |
|y 280 nm, además se realizo la electroforesis en gel deagarosa 1 %. | |Universidad Tecnológica de Pereira |
| | |condorblokeo@hotmail.com |
| | | ||PALABRAS CLAVES: buffer, electroforesis, membrana nuclear | | |

1. INTRODUCCIÓN


El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las células que forman un individuocontienen una copia idéntica de ADN. Las células eucariotas como las nuestras o las de las cebollas, contienen ADN en el interior de un compartimiento llamado núcleo celular. Por ello, para extraer el ADN, deberemos romper la membrana celular y la membrana nuclear. Las células vegetales además cuentan con una pared rígida de celulosa que también tendremos que romper para liberar el ADN. En todo momento esmuy importante proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y por ultimo debe aislarse utilizando etanol.

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Una buena extracción de ADN es muy importante en estudios del genoma, mutaciones, secuenciación y procesos de ingeniería genética por lo que es preciso analizar cuál es el mejor procedimiento.

2. MATERIALES Y METODOS


2.1 MUESTRA VEGETAL se empleo aproximadamente 70 mgde tejido de cebolla de huevo empleada para la extracción de ADN.

2. PROCEDIMIENTO # 1:

Se tomó la muestra de cebolla, se maceró y se realizo el procedimiento tal y como la guía lo indicaba. En este procedimiento se empleo el buffer 1 y 2 de la siguiente manera:

• Se agrego 1 mL de Buffer 1, el cual tiene varias funciones. El EDTA se encarga de quelar iones presentes en la muestracomo el Ca y Mg los cuales son cofactores para enzimas degradadoras como las endonucleasas, el mercaptoetanol ayuda en la desnaturalización de la doble cadena de ADN mediante la lisis de ciertos enlaces GC (Guanina-Citosina), el tris-HCl estabiliza el pH de la solución que es importante en la extracción de ADN para que no haya una lisis total de las hebras de ADN. Todos estos componentes ayudan aevitar una degradación del ADN y para aumentar la cantidad de ADN.

En este momento debe haber una solución con proteínas, ADN, enzimas y otros compuestos y moléculas, además de organelos celulares.

• Esta solución se centrifugo, en esta etapa precipitan los componentes de la mezcla más pesados como organelos (mitocondrias, fragmentos de pared y membrana celular, proteínas grandes y las...