EXTRACCIÓN DE LA ENZIMA LIPASA POR MEDIO DE L HONGO A. NÍGER, OBTENIDO DE LA DESCOMPOSICIÓN DEL TOMATE

EXTRACCIÓN DE LA ENZIMA LIPASA POR MEDIO DE L HONGO A. NÍGER, OBTENIDO DE LA DESCOMPOSICIÓN DEL TOMATE

Leydi Mayorga, Diana Poveda, y Yesid Santisteban

RESUMEN
Este proyecto se basa en el asilamiento de microrganismos lipoliticos a partir del hongo A. Níger, producido por la descomposición del tomate, mediante el cultivo hagar yema de huevo que se considera un medio solido, por que alestar en temperatura ambiente se gelifica, el tipo de siembra utilizado fue por agotamiento ya que es el mas adecuado para la separación de las colonias por tamaño y diluciones del inóculo en agua peptonada, para facilitar en contero de las colonias.
Igualmente para determinar la eficacia de la actividad lipolítica se hiso por medio del contacto de la enzima producida con aceite de olivadurante dos horas y media en constante agitación, para después ser valorado con NaOH.
Esta valoración se realizo por triplicado y comparándose con el blanco, en el cual la concentración de acido oleico no resultado tan alta como la de la muestra, esto se debe a que en el blanco no se agregó la enzima la cual es la que al reaccionar con los triglicéridos del aceite por medio de una hidrólisisproduce acido oleico



INTRODUCCIÓN
La lipasa es una enzima, que principalmente se encuentra en todos los seres vivos para disgregar las grasas de los alimentos de manera que sean más fáciles de absorber. También se encuentra en vegetales que las producen para fabricar reservas de energía y, en algunos hogos procedentes de la descomposición de frutas o legumbres, como el tomate o la lechuga.
.El mecanismo de la acción de la lipasa consiste en la hidrolisis de un acido graso en presencial de alcohol, obteniendo un éter y liberando agua.
http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/5317/asf1de2.pdf;jsessionid=93E35A4CE897EC3BEA6CA3E58D440A41.tdx2?sequence=1
En la actualidad son usadas en las industrias de hidrocarburos, alimenticia (láctea), y en farmacéutica.
Debido a la importanciade la lipasa en diferentes industrias como la del detergente y otras, se obtuvo un extracto enzimático que contuviera la enzima de interés, se identificaron las materias primas, teniendo en cuenta que no fueran contraproducentes para el planeta y se procedió a su posterior caracterización cualitativa como cuantitativa, esto con el fin de cerciorarnos que estuvieran en optima calidad.MATERIALES Y MÉTODOS
Para la extracción se usaron en principio varios cultivos del hongo A. Níger, sin resultado alguno, al ver este primer intento fallido se procedió a sembrar un inóculo de aceite de cuero de pollo en el cual el crecimiento microbiano evidente.
Inóculo
El inóculo se realizo pesando 10 g del tomate en descomposición con el hongo, para luego mezclarse con 90 ml de agua peptonada.Es te mezcla se llevo a baño maría a 40 °C durante 15 minutos. Después de tomo 1 ml de esté y se llevo a un tubo de ensayo con 9 ml de agua peptonada (10-1), de esta dilución se tomaron 0,1 ml y se llevo a un segundo tubo (10-2), y se repite de nuevo con un ultimo tubo (10-3).
Agar yema de huevo
Se realizo una solución de NaCl al 0,85% (p/v) y después de esterilizada en el autoclave y atemperatura ambiente se mezclo con la yema de huevo.
En otro recipiente me mezclaron 16 g de peptona, 2 g de fosfato disodico, 0,1 ml de sulfato de magnesio 0,5%, (p/v), 0,8 g de glucosa y 12,5 g de agar. Esto se esterilizo en el autoclave para después ser mezclado con la primera solución que contenía la yema de huevo.
Siembra
Se toman 0,1 ml de la muestra original, como de cada uno de los tubos deensayo, con una pipeta se realiza la siembra por agotamiento, y se dejan en la incubadora a 37°C.

A los ochos días se le realizo tinción de Gram, para caracterizar los microrganismos.
Obtención del extracto enzimático
Las colonias que proliferaron se siembran en un medio de cultivo liquido, (que es igual al primero pero sin agar), y se dejan en el fermentador, que nos brinda un ambiente...