Factores que afectan la actividad enzimatica

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Bioquímica. Bioquímica. Practica No. 1. 2010.
FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE UNA REACCION ENZIMATICA

Laboratorio de Bioquímica
1 de Octubre de 2010

Resumen:

El objetivo de esta práctica es observar y analizar cómo es que influye la concentración de la enzima, la temperatura y el PH en la actividad enzimática, como es que interviene en la velocidad de la reacción, tambiénaprender que las enzimas necesitan los medios adecuados, o más bien específicos para llevar a cabo todas sus actividades con mayor eficiencia, realizando varias pruebas en donde se llevo a cabo la prueba de lugol para saber si nuestra enzima se había hidrolizado o se había desnaturalizado por las diferentes factores a la que las sometimos, llegamos a diferentes resultados en donde pudimos observar quenuestras enzimas si se ven afectadas por todos estos factores a las que la sometimos.
Introducción:
Uno de los factores que afecta a la velocidad de una reacción catalizada por un enzima purificado in vitro es la concentración de sustrato presente. El estudio de los efectos de la concentración de sustrato s complicado porque el sustrato cambia en el transcurso de una reacción a medida que elsustrato se convierte en producto. A concentraciones de sustrato relativamente bajas, Vo aumenta casi linealmente con el incremento de sustrato. A mayores concentraciones de sustrato, Vo aumenta incrementos cada vez menores en respuesta a incrementos de sustratos. Finalmente se alcanza un punto más allá del cual se dan incrementos pequeñísimos de Vo con el incremento de sustrato. Esta meseta en elvalor de Vo se denomina velocidad máxima, Vmax. Otro factor que afecta a la velocidad es el PH, las enzimas tienen un PH optimo o un intervalo de PH en el que su actividad es máxima; a valores superiores o inferiores de PH la actividad disminuye. El intervalo de PH en el que cambia la actividad enzimática puede proporcionar alguna pista sobre que aminoácido está implicado, un cambio en laactividad enzimática cerca de PH 7,0 refleja frecuentemente la valoración de un residuo de His. Los estudios de la dependencia respecto al PH de las enzimas son útiles para sugerir que aminoácidos pueden ser operativos durante el proceso catalítico. Otro factor importante en velocidad de actividad enzimática es la temperatura de muchas enzimas y su temperatura optima está entre los 40 y 45 °C para lasenzimas de mamíferos. Por encima de esta temperatura se produce desnaturalización térmica del enzima. Entre 0 y 40 °C muchas enzimas muestran un incremento del doble de la actividad por cada 10 °C de incremento en la temperatura. En condiciones de hipotermia muchas reacciones enzimáticas están deprimidas, lo que explica la inferior demanda de oxigeno de los organismos vivos a baja temperatura. Lamutación de una enzima a una forma termolábil puede tener consecuencias graves.
Lugol: la solución de lugol consiste en 5 g de I2 y 10 g Kl, diluido con 85 ml de agua destilada, obteniéndose una solución marrón con una concentración total de yodo de 150 mg/ml. El yodura de potasio hace el yodo diatómico soluble en agua, debido a la formación de iones triyoduro. Se utiliza como indicador en laprueba de yodo, que sirve para identificar polisacáridos como almidones, glucógeno y ciertas dextrinas, formando un complejo de inclusión termolábil que se caracteriza por ser colorido, donde diferentes colores según las ramificaciones que presente la molécula. No reacciona con azucares simples como la glucosa o la fructosa.
Metodología:
• Concentración de la enzima:
Se rotulan 3 tubos de ensayoenumerando del 1 al 4, después se añade 5 ml de almidón al 1% a los cuatro tubos de ensayo y por consiguiente se añade al tubo numero uno una gota de saliva; al tubo número dos, dos gotas; al número tres, cinco gotas y al número 4, diez gotas. Al terminar se procede a gitar perfectamente cada uno; después de esto se pasa a realizar la prueba de yodo; se añade una gota del contenido de cada tubo...
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